Cre/LoxP增强特异性启动子诱导的自杀基因抑制晶状体上皮细胞增殖的实验研究

发布时间：2021-09-07 11:55

　　第一部分增强型特异性表达载体组合的构建、病毒包装和纯化目的构建由Cre/LoxP介导的增强型特异性表达载体组合（包含调控载体Lenti-LEP503-HSVtk-Cre和靶载体Lenti-HPGK-Loxp-EGFP-pA-Loxp-HSVtk）,即增强型慢病毒介导人晶状体上皮细胞（HLEC）特异性启动子LEP503诱导的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因/丙氧鸟苷（HSV-tk/GCV）系统,以建立高效特异的慢病毒转基因平台。方法利用分子克隆技术,用PCR方法从Lenti-Cre中克隆Cre酶,亚克隆至T载体,经EcoRI和SalI双酶切,同时质粒Lenti-LEP503-HSVtk-EGFP经EcoRI和SalI双酶切,定向连接得调控载体Lenti-LEP503-HSVtk-Cre;人工合成片段Loxp-polyA-Loxp,polyA前含PmeI酶切位点,与T载体连接后,插入两端含pmeI酶切位点的增强型绿色荧光蛋白（EGFP）全序列引物扩增的片段,形成Loxp-EGFP-pA-Loxp载体,与质粒PRRL一起经BamHI和SalI双酶切,定向连接。PCR方法克隆IRES-HSVtk,两端... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：79 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

实验用载体质粒酶切图谱，pSPAXZ，pMDZ.G，pRRLSIN.ePPT.PGK/GFP.WPRE，PLOX一CW一CRE，T载体

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Lenti一HPGK一Loxp一EGFP一pA一L

【参考文献】：
期刊论文
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本文编号：3389501