血蓝蛋白是中华绒鳌蟹重要的高分子量过敏原

发布时间：2021-09-09 07:13

　　目的:证明血蓝蛋白是中华绒螯蟹的一种重要的高分子量过敏原。方法:采用裂解液法提取蟹总蛋白,通过SDS-PAGE、二维电泳及Western blot分析蟹中过敏原组分并进行比对,再通过质谱分析鉴定未知过敏原。以临床中华绒螯蟹过敏患者的血清作为识别抗体,通过斑点免疫印记实验证明疑似蛋白的致敏特性。结果:通过SDS-PAGE及二维电泳分析,证明本实验所提取的蟹总蛋白组分完全。Western blot结果显示,中华绒螯蟹至少有18种与阳性血清反应的组分,其中,70⁸0k D处两个蛋白处于同一等电点,可能为同一蛋白,且反应斑点清晰;质谱分析结果显示疑似蛋白为血蓝蛋白;斑点免疫印记结果显示血蓝蛋白与患者血清的反应频率为61%。结论:血蓝蛋白为中华绒鳌蟹中一种重要的高分子量过敏原。 

【文章来源】：中国免疫学杂志. 2015,31(10)北大核心CSCD

【文章页数】：6 页

【部分图文】：

蟹总蛋白粗提液中蛋白组分分析结果

状痔嵋?的SDS-PAGE结果如图1所示，至少有18条明显的蛋白条带。其中，20、34、40kD处分别为已知的肌质钙结合蛋白、原肌球蛋白、精氨酸激酶。在70～90kD之间有四条明显的条带，但该分子量范围内的蛋白尚未见相关报道。二维电泳分析结果与SDS-PAGE结果一致，大部分蛋白组分的等电点在4～9之间，其中，25～45kD之间的蛋白着色最深，含量最丰富，应多为已报道的原肌球蛋白及精氨酸激酶。在等电点5.2、70～80kD处可分辨两个明显的点。结果与SDS-PAGE结果相符。2.2蟹中过敏组分分析蟹总蛋白提取液经一维印记分析，结果如图2A所示，中华绒螯蟹过敏原中，除34kD原肌球蛋白、40kD精氨酸激酶外，55kD以上的高分子量蛋白占有很大比例，且70～80kD处反应条带较深。利用二维印记，使用混合阳性图1蟹总蛋白粗提液中蛋白组分分析结果Fig．1AnalysisofcomponentsofextractofEriocheirsinensisproteinsNote:A.SDS-PAGEanalysis.M.Marker;1.Hemocyanin;2.ExtractofEriocheirsinensisproteins;B.Two-dimensionalelectrophoresisa-nalysis.M.Marker;1and2.Suspectedproteins.血清作为探针进一步分析，结果如图2B所示，25～45kD处出现多个阳性反应点，与已报道的研究结果相符。同时，70～80kD处出现了阳性反应点，证明该处蛋白是中华绒螯蟹中的过敏原。2.3质谱分析结果对二维电泳70～90kD处两个蛋白点进行质谱分析，肽指纹图谱及质谱结果如图3、表1所示，其中，图3A为疑似蛋白1，普库索取号为gi|334145788，预测分子量为78390，等电点约为5.21，Mascot得分为107，有16个肽段可与中华绒螯蟹血蓝蛋白匹配;图3B为疑似蛋白2，图2蟹总蛋白粗提液中过敏原组分分析结果Fig．2AnalysisofallergensofextractofEriocheirsinensisproteinsNote:A.Wester

榉址治鼋峁?Fig．1AnalysisofcomponentsofextractofEriocheirsinensisproteinsNote:A.SDS-PAGEanalysis.M.Marker;1.Hemocyanin;2.ExtractofEriocheirsinensisproteins;B.Two-dimensionalelectrophoresisa-nalysis.M.Marker;1and2.Suspectedproteins.血清作为探针进一步分析，结果如图2B所示，25～45kD处出现多个阳性反应点，与已报道的研究结果相符。同时，70～80kD处出现了阳性反应点，证明该处蛋白是中华绒螯蟹中的过敏原。2.3质谱分析结果对二维电泳70～90kD处两个蛋白点进行质谱分析，肽指纹图谱及质谱结果如图3、表1所示，其中，图3A为疑似蛋白1，普库索取号为gi|334145788，预测分子量为78390，等电点约为5.21，Mascot得分为107，有16个肽段可与中华绒螯蟹血蓝蛋白匹配;图3B为疑似蛋白2，图2蟹总蛋白粗提液中过敏原组分分析结果Fig．2AnalysisofallergensofextractofEriocheirsinensisproteinsNote:A.Western-blotanalysisofextractofEriocheirsinensisproteins．M.Marker;1－6.Serafrom6crab-allergicsubjects;N.Negativeserum;B.Two-dimensionalWesternblotanalysisofextractofEri-ocheirsinensisproteins.1.Suspectedproteins.图3疑似蛋白肽指纹图谱Fig．3PeptideMassFingerPrintofsuspectedproteinsNote:A.PeptideMassFingerPrintofsuspectedprotein1;B.PeptideMassFingerPrintofsuspectedprotein2.ObservedMr(expt)Mr(calc)DeltaStartEndMissIonsPeptide.张盈莹等血蓝蛋白是中华绒鳌蟹重要的高分子量过敏原第10期·1377·

【参考文献】：
期刊论文
[1]中国人的虾、蟹致敏过敏原组分分析[J]. 孙一帆,黄建芳,王彩霞,向军俭.  中国免疫学杂志. 2014(10)
[2]3种不同方法提取芒果致敏原组分分析[J]. 侯丽英,张盈莹,朱黎娜,谷冬梅,林书祥,李会强.  中国食品卫生杂志. 2014(05)
[3]天津地区梭子蟹中过敏原组分分析[J]. 李婵,李韶深,任杰,徐丽敏,朱愉,李会强.  中国食品卫生杂志. 2012(05)



本文编号：3391664