Ku80在石英致DNA双链断裂修复的DNA-PK/JNK信号转导通路中的作用

发布时间：2021-09-08 17:48

　　石英粉尘（简称石英）是我国最严重的职业危害因素之一,既可致矽肺,也可致癌。石英可诱导细胞周期改变,也可引起DNA双链断裂损伤（DNA double strand breaks, DSBs）。DNA损伤后,在信号分子介导下细胞周期发生阻滞,DNA损伤修复蛋白被激活进行DNA损伤修复。DNA依赖性蛋白激酶（DNA dependent protein kinase, DNA-PK）是DSBs的传感器之一,识别受损伤的DNA,磷酸化组蛋白H2AX,参与DSBs的非同源末端连接。DNA-PK由调节亚单位Ku和催化亚单位（DNA-PK catalytic subunit, DNA-PKcs）组成,Ku是Ku70与Ku80蛋白通过非共价键紧密结合形成的异二聚体结构。以往研究表明,DNA-PK作为蛋白激酶可将多种重要的功能蛋白底物,如Akt、JNK、AP-1、p53等磷酸化,激活DNA损伤信号转导通路,促进修复相关因子的转录、引起细胞周期阻滞或诱导细胞凋亡。本课题组前期研究发现,Akt/JNK/AP-1信号通路可调节CyclinD1和CDK4表达,参与石英诱导的细胞周期S期阻滞；DNA-PKcs具有D... 

【文章来源】：中国疾病预防控制中心北京市

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

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中文摘要
ABSTRACT
英文缩写词
前言
工作假说
技术路线
第一部分 KU80对石英致DNA双链断裂修复及DNA-PK/JNK转导通路中信号分子的影响
    引言
    材料与方法
        1. 实验材料
            1.1 细胞系
            1.2 感受态细菌
            1.3 质粒
            1.4 主要试剂
            1.5 主要设备与器材
            1.6 主要试剂配制
        2. 主要实验方法
            2.1 质粒转化大肠杆菌
            2.2 小规模扩增质粒
            2.3 质粒DNA的纯化
            2.4 建立稳定转染的细胞系
            2.5 Western blot实验方法
            2.6 免疫荧光实验
            2.7 彗星实验
            2.8 微核实验
            2.9 统计学方法
    结果
        1 抑制Ku80表达的稳定转染体的建立及鉴定
            1.1 Ku80的siRNA质粒
            1.2 Ku80的siRNA质粒转染人胚肺成纤维细胞
            1.3 稳定转染体的鉴定
        2 Ku80对石英致DSBs修复的影响
            2.1 Ku80与石英刺激剂量反应关系和时间反应关系
            2.2 Ku80对H2AX磷酸化的影响
            2.3 中性彗星实验
            2.4 微核实验
        3 Ku80对DNA-PK/JNK通路中信号分子表达及磷酸化的影响
            3.1 Ku 80与Ku 70、DNA-PKcs的关系
            3.2 Ku80对Akt、JNK、AP-1(侧重c-Jun)的影响
        4 Akt、JNK、AP-1活性对γH2AX磷酸化水平的影响
    讨论
        1. 建立Ku80的siRNA质粒稳定转染人胚肺成纤维细胞的细胞系
        2. Ku80表达对石英所致DSBs修复的影响
        3. Ku80表达对DNA-PK/JNK信号通路中信号分子表达及活化的影响
        4. Akt、JNK、AP-1活性对γH2AX磷酸化水平的影响
    小结
第二部分 KU80对石英诱导的细胞周期改变的影响
    引言
    材料与方法
        1. 细胞系
        2. 主要仪器和试剂
        3. 主要实验方法
        4. 统计学方法
    结果
        1 Ku80表达对细胞周期的影响
            1.1 Ku80表达对石英诱导的细胞周期改变的影响
            1.2 Ku80对石英诱导的周期蛋白改变的影响
        2. CDK4、CyclinDl表达对石英致DSBs修复的影响
        3. DNA-PK/JNK通路及p53表达对CyclinE、CDK2表达的影响
            3.1 Ku80表达对石英诱导的CyclinE、CDK2水平的影响
            3.2 DNA-PKcs表达对石英诱导的CyclinE、CDK2水平的影响
            3.3 Akt、JNK及AP-1活性对石英诱导的CyclinE、CDK2水平的影响
            3.4 p53表达对石英诱导的CyclinE、CDK2水平的影响
    讨论
    小结
第三部分 PI3K对石英致DNA双链断裂修复的影响
    引言
    材料与方法
    结果
        1. PI3K对γH2AX磷酸化的影响
        2. PI3K对Ku70、Ku80和DNA-PKcs蛋白水平的影响
        3. PI3K对石英致DSBs修复的影响
    讨论
    小结
全文总结
参考文献
综述:KU蛋白与DNA双链断裂修复关系的研究进展
致谢
个人简历


【参考文献】：
期刊论文
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[3]CyclinE-CDK2相关蛋白与细胞周期调控[J]. 舒伟,马清钧,叶昕.  生物技术通讯. 2008(01)
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[5]RNAi抑制Ku80表达后促进宫颈癌SiHa细胞的放射敏感性[J]. 庄亮,于世英,黄晓园,熊华,徐慧婷.  中国癌症杂志. 2007(05)
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[8]单细胞凝胶电泳图像分析系统的研制及应用[J]. 朱志良,庄志雄,黄钰,籍涛.  中华劳动卫生职业病杂志. 2001(04)
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[10]石英致MAPK/cyclinD1-CDK4信号转导通路的活化[J]. 沈福海,范雪云,刘秉慈,贾效伟,高艾,尤宝荣,叶萌,杜宏举,黄传书,史香林.  中华劳动卫生职业病杂志. 2007 (01)



本文编号：3391220