基于T7启动子表达系统的呼吸道合胞病毒微型基因组的拯救

发布时间：2017-05-01 19:05

  本文关键词：基于T7启动子表达系统的呼吸道合胞病毒微型基因组的拯救，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的以T7启动子表达系统为基础，通过RNA病毒反向遗传学操作，拯救人呼吸道合胞病毒（human respiratory syncytial virus, RSV）微型基因组。 方法构建可分别表达RSV四种核壳体蛋白的辅助质粒px8δT-PT1-N、px8δT-PT1-P、 px8δT-PT1-M2-1和px8δT-PT1-L以及含增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorecent protein, EGFP）开放读码框（open reading frame, ORF）、RSV病毒前导序列（leader region/genomic promotor）、转录起始信号（gene start,GS）、转录终止信号（gene end, GE）和尾随序列（trailer region/antigenomic promoter）等顺式作用元件（cis-acting elements）组成的微型反基因组重组质粒pSC11-E，在上述的5个质粒中，均引入T7RNA多聚酶（T7RNA polymerase, T7RNP）启动子，经鉴定正确后，先以pSC11-E转染RSV感染的可组成型表达T7多聚酶的BSRT7/5细胞进行拯救，确定微型基因组编码质粒设计的合理性，，而后通过5个质粒共转染BSR T7/5细胞，并通过荧光显微镜观察荧光蛋白的表达情况判断拯救是否成功。 结果RSV四种核壳体蛋白的辅助质粒px8δT-PT1-N、 px8δT-PT1-P、px8δT-PT1-M2-1和px8δT-PT1-L转染BSR T7/5细胞后，Western blot证实四种核壳体蛋白能顺利表达，分别以RSV作为辅助病毒及可表达RSV四种核壳体蛋白的辅助质粒实现了对pSC11-E的拯救。 结论成功构建了基于T7启动子表达系统的RSV微型基因组5质粒拯救系统，该系统的成功构建，有助于今后对RSV病毒开展基因修饰研究。
【关键词】：呼吸道合胞病毒 微型基因组 反向遗传学 拯救
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R373
【目录】：

• 中英文缩略词表5-7
• 中文摘要7-8
• Abstract8-9
• 实验设计与流程9-10
• 前言10-12
• 实验材料12-16
• 实验方法16-39
• 结果39-43
• 讨论43-46
• 结论46-47
• 参考文献47-50
• 附录50-51
• 致谢51-52
• 综述52-63
• 参考文献59-63

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