γδT细胞在急性乙型肝炎病毒感染小鼠模型（水动力法）中的变化分析

发布时间：2017-05-01 19:02

  本文关键词：γδT细胞在急性乙型肝炎病毒感染小鼠模型（水动力法）中的变化分析，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：γδT细胞是一类重要的非特异性免疫细胞。我们的前期研究表明，γδT细胞在慢性乙型肝炎患者中呈现表型及功能异常。而本课题将通过构建急性乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus，HBV）感染小鼠模型，重点观察肝脏内γδT细胞的比例、激活表型及细胞因子表达的变化，，探讨γδT细胞在HBV急性感染清除机制中的作用。拟为全面揭示γδT细胞在HBV感染早期及慢性化过程中的作用提供一定的实验依据。 方法： 1.用尾静脉高压水动力法注射HBV基因组1.3倍体真核表达质粒(pcDNA3.1-HBV1.3)构建急性乙型肝炎病毒感染小鼠模型。 2.用免疫组化法检测模型小鼠肝脏内HBsAg及HBcAg的表达；用电化学发光法检测模型小鼠外周血内HBsAg及HBeAg水平。 3.用流式细胞仪方法检测pcDNA3.1-HBV1.3质粒模型组（pHBV组）、pcDNA3.1对照质粒组（pcDNA组）在质粒注射后不同时间肝脏、脾脏及外周血中γδT细胞比例的变化。 4.用流式细胞仪方法检测pHBV组肝脏中γδT细胞表面CD25与CD69激活分子表达的变化。 5.用流式细胞仪方法检测pHBV组肝脏中γδT细胞内IFN-γ及TNF-α细胞因子产生的变化。 6.用SPSS统计软件分析各时间点及各组间的差异。 结果： 1.急性乙型肝炎病毒感染小鼠模型的构建 1.1pHBV组血清中的HBsAg在第1天即为阳性（33.64±14.88COI），到第5天上升到最高（146.92±24.23COI），而后逐渐降低。 1.2pHBV组血清中的HBeAg在第1天为阳性并达峰值（2.26±2.34COI），然后降低。 1.3pHBV组肝脏内表达HBsAg或HBcAg肝细胞的阳性率在第1天为最高(10～20%)，而后迅速降低(＜5%)。 1.4pcDNA组的外周血及肝脏内的HBV抗原在各个时间点均为阴性。 2.急性HBV感染小鼠模型肝脏、脾脏及外周血内γδT细胞比例的变化 2.1正常对照小鼠（NC）肝脏中的γδT细胞比例（4.5±0.6％）明显高于脾脏（2.1±0.3％）或外周血（1.2±0.6％），差异有显著性（p0.01）。2.2pHBV组中，肝脏内的γδT细胞的比例在第1天即升高至8.3±4.3％，而后降低，到第10天时，又升高至8.0±1.2％。统计结果显示，pHBV1d的比例明显高于NC，pHBV5d和pHBV15d的比例，差异有显著性（p0.05）。 2.3pHBV组各时间点脾脏或外周血中的γδT细胞比例与NC比较未见有明显的变化，差异无显著性（p0.05）。 2.4pcDNA组中，小鼠肝脏、脾脏或外周血中的γδT细胞比例与NC比较差异无显著性（p0.05）。 3.急性HBV感染小鼠模型肝脏内γδT细胞CD25及CD69表达的变化 3.1NC肝脏中的CD25+γδT或CD69+γδT细胞比例分别为3.1±0.5％、9.9±2.7％。 3.2pHBV组小鼠肝脏内CD25＋γδT细胞比例在第5天升高至最高8.4±3.7％，但各时间点间，及与NC间的差异无显著性（p0.05）。 3.3pHBV组小鼠肝脏内CD69+γδT细胞比例随着时间延长而逐渐降低，第10天的CD69+γδT细胞比例与其它时间点及NC比较差异有显著性（p0.05）。 4.急性HBV感染小鼠模型肝脏的γδT细胞内IFN-γ或TNF-α细胞因子表达的变化 4.1正常对照小鼠（NC）肝脏中的IFN-γ+γδT或TNF-α+γδT细胞比例分别为5.1±0.4％、4.7±0.6％。 4.2pHBV组第1天肝脏IFN-γ＋γδT细胞比例升高至8.6±3.2％，之后即刻降低,与其它时间点及NC比较，差异无显著性（p0.05）。 4.3pHBV组肝脏内TNF-α阳性的γδT细胞比例随着时间而缓慢上升，但各个时间点间或与NC间的差异无显著性（p0.05）。 结论： 1.急性乙型肝炎病毒感染小鼠模型构建成功。 2.该模型小鼠的肝脏内γδT细胞的比例、激活表型或细胞因子产生均发生了显著性变化。 3.提示γδT细胞可能参与了急性HBV感染与清除过程。
【关键词】：γδT细胞 乙型肝炎病毒 急性感染 非特异性免疫
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R512.6;R-332
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 摘要6-10
• ABSTRACT10-15
• 前言15-17
• 1 材料17-21
• 2 实验方法21-25
• 3 统计学处理25
• 4 结果25-35
• 5 讨论35-38
• 全文总结38-40
• 参考文献40-43
• 文献综述43-52
• 参考文献49-52
• 致谢52-53
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文53-54

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 ;The Roles of Innate Immune Cells in Liver Injury and Regeneration[J];Cellular & Molecular Immunology;2007年04期

2 ;Therapeutic effect of autologous dendritic cell vaccine on patients with chronic hepatitis B: A clinical study[J];World Journal of Gastroenterology;2005年12期

  本文关键词：γδT细胞在急性乙型肝炎病毒感染小鼠模型（水动力法）中的变化分析，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：339440