离体大鼠表皮干细胞热损伤模型制作的研究

发布时间：2017-05-03 00:05

  本文关键词：离体大鼠表皮干细胞热损伤模型制作的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：第一部分 分离鉴定SD鼠表皮干细胞 目的对SD大鼠表皮干细胞进行分离培养，并对所培养表皮干细胞形态，细胞表面标志物进行检测，以确保所培养的细胞群为富集了表皮干细胞的细胞群。 方法利用胰酶消化法分离大鼠表皮干细胞，Ⅳ型胶原差速贴壁法进行筛选，克隆实验来鉴定细胞增殖能力，，免疫荧光共染角蛋白19及β1整合素，联合阴性标记物角蛋白10，进行表型鉴定。 结果倒置相差显微镜所得细胞形态多呈类圆形、体积小、核大，增殖后期可见马路石样结构。荧光检测结果表明所细胞β1整合素及角蛋白19共表达，阴性标记物角蛋白10无明显表达。克隆形成实验显示所分离的细胞有较强的增殖能力。 结论成功建立了获得表皮干细胞体外分离的方法 第二部分 SD鼠离体表皮干细胞热损伤模型建立 目的体外建立SD鼠ESCs热损伤模型，研究皮肤烧伤后ESCs生物学变化。 方法体外培养大鼠表皮干细胞，实验组细胞在水浴锅中分别以51、52、53、54℃孵育30s，对照组细胞37℃孵育30s，每组重复3次。用流式细胞仪对细胞存活率进行定量分析，热损伤后干细胞内HSP70蛋白表达量的变化通过免疫印迹试验检测，使用实时荧光定量PCR法检测HSP70mRNA的变化。 结果随着热损伤温度的升高，表皮干细胞中凋亡和死亡细胞逐渐增加，细胞存活率逐渐下降；52℃时表皮干细胞存活率为85.2%，53℃时为83.7%，54℃存活率为53.2%。Western blot检测结果显示随温度升高HSP70表达量升高，53℃达到高峰，54℃时表达量开始下降当仍比对照组高。RTqPCR检测结果显示HSP70mRNA表达量在一定范围内随温度升高而增加，以53℃的HSP70mRNA表达量最为显著（P0.05），而在54℃，55℃时表达量急剧下降并且与对照组相比显著降低。 结论热损伤能造成离体大鼠表皮干细胞凋亡，HSP70表达量在一定温度范围内增高并为细胞提供保护作用，53℃孵育30s为构建表皮干细胞热损伤模型的较好条件。该模型可为后继有关实验提供良好的研究平台。
【关键词】：克隆 角蛋白19 整合素β1 表皮干细胞 热损伤 HSP70 细胞模型
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R-332
【目录】：

• 缩略词表4-5
• 中文摘要5-7
• Abstract7-9
• 前言9-11
• 参考文献10-11
• 第一部分 分离鉴定 SD 鼠表皮干细胞11-27
• 材料和方法11-18
• 实验结果18-22
• 讨论22-25
• 参考文献25-27
• 第二部分 离体表皮干细胞热损伤模型建立27-45
• 材料和方法27-35
• 实验结果35-40
• 讨论40-43
• 参考文献43-45
• 全文总结45-46
• 文献综述46-57
• 参考文献54-57
• 成果目录57-58
• 致谢58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 邓先见;姚波;李力;徐苗苗;顾玮;杨策;蒋建新;;大鼠表皮基底层干细胞体外分离与培养[J];重庆医学;2013年21期

2 钟清玲;刘德伍;刘繁荣;彭燕;张向荣;蓝蔚;;糖尿病大鼠表皮干细胞及其增殖分化相关蛋白的研究[J];中国修复重建外科杂志;2010年02期

  本文关键词：离体大鼠表皮干细胞热损伤模型制作的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：341941