人脐带华尔通氏胶源间充质干细胞向男性生殖细胞诱导分化的研究
发布时间：2021-10-12 06:47
[背景与目的]生殖细胞缺陷所致的男性不育症是目前临床难于攻克的疾病,传统辅助生殖技术尚无法从根本上解决此类病人的生育问题,精原干细胞移植是突破这一瓶颈的理想途径。人脐带间充质干细胞具有多向分化潜能,一定条件下可向三个胚层组织细胞分化,前期的研究表明,人脐带间充质干细胞在体外诱导后表达部分生殖细胞标记,移植到不育小鼠体内不发生排斥反应,且可发生迁移并能存活至少120天。本研究将在前期研究的基础上,进一步探讨人脐带间充质干细胞在体内外向精原细胞的分化潜能及其生物学特性。[材料与方法]采用差异贴壁法分离、培养、扩增出人脐带间充质干细胞,流式细胞术检测干细胞相关标记表达情况；利用新生小鼠睾丸细胞培养液、维甲酸、睾酮作为条件诱导液,将人脐带间充质干细胞在条件诱导液中培养,显微镜观察诱导前后细胞的形态学变化；RT-PCR、细胞免疫荧光检测男性生殖细胞相关标记的表达；将人脐带间充质干细胞移植于不育小鼠睾丸内,RT-PCR检测体内移植细胞的生殖细胞相关标记的表达。[结果]人脐带间充质干细胞具有多能干细胞的生物学特性,高表达多能干细胞标记CD44、CD29、CD59、OCT4;人脐带间充质干细胞在生殖细...
【文章来源】：汕头大学广东省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RT一PCR检测HUMSCS在条件诱导液诱导下表达精原干细胞特异标记;A:诱导后第3
图gA:转染PIREsZ一EGFP质粒后绿色荧光蛋白在I侧队SCs中的表达;B:移植1月后俐MSCs在不育小鼠翠丸内定植，绿色为移植的扭服SCS，蓝色为DAPI染色的小鼠翠丸细胞核。FiguregA:ExPressionofEGFPinHUMSCsafterlabeledwithPIRESZ一EGFP:B:HUMSCsapPearedinthetestesofreeiPientmieeafter1monthtransPlantation，transPlantedeellshowngreenandnucleiareshowninblue，DApl(4’，6’一diamidino一2一Phenylindole)staining.magnifieation:x2003.人生殖细胞相关标记在小鼠翠丸内的表达将移植7天，30天及未移植细胞的小鼠肇丸取出，提取RNA，RT-PCR检测到未移植的细胞及移植细胞7大后的小鼠翠丸不表达人的生殖细胞标记，而移植了HUMSCSI月后的小鼠翠丸内表达有人的生殖细胞标记Stella、dazl(图10)，人精子作为阳性对照。D八之LU7D.1阴SPMU7D，阴SPM
30天及未移植细胞的小鼠肇丸取出，提取RNA，RT-PCR检测到未移植的细胞及移植细胞7大后的小鼠翠丸不表达人的生殖细胞标记，而移植了 HUMSCSI月后的小鼠翠丸内表达有人的生殖细胞标记Stella、dazl(图10)，人精子作为阳性对照。D八之L U7D.1阴 SPMU7D，阴SPM图10将HUMSCs移植于不育小鼠翠丸后7天、1月取小鼠翠丸行Rf-PCR检测人生殖细胞标记stella、daZI表达情况，M(marker)、sP(人精子)、7D、IM(移植7大、l月)、u(未移植)。 Figure10Rf-PCRdetectedhumanmalegermeellmarkerstella、 dazlexPressedinthemice testesafter7dayand1month’ 5transPlantationofHUMSCs.M:marker， SP:humansPerm，7D:7day， IM:1month，U:untransPlant.
【参考文献】：
期刊论文
[1]体内诱导人脐带间充质干细胞向男性生殖细胞分化的实验研究[J]. 林丽敏,吴小英,马廉,唐秋灵,林广裕,黄天华,谢庆东. 中国输血杂志. 2009(03)
[2]人脐带间充质干细胞生物学特性及向类肝细胞的分化[J]. 闫俊卿,韩涛,朱争艳. 世界华人消化杂志. 2008(15)
[3]人脐带间充质干细胞向胰岛样细胞的分化[J]. 王爱红,何红燕,罗敏洁,黄天华,马廉,马桂霞,林丽敏,林广裕,史雪川. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(21)
[4]人脐带间充质干细胞分化为胰岛β细胞的实验研究[J]. 马桂霞,何红燕,罗敏洁,黄天华,肖升平,崔冰琳,马廉. 实用儿科临床杂志. 2008(08)
[5]脐带间充质干细胞在精原细胞培养条件下的生殖细胞特性[J]. 唐秋灵,何红燕,林广裕,林丽敏,谢庆东,黄天华,马廉. 实用儿科临床杂志. 2008(05)
[6]人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的研究[J]. 林晓波,何红燕,罗敏洁,崔冰琳,冯学永,蒋学武,谢庆东,黄天华,应文娟,马廉. 实用儿科临床杂志. 2007(13)
[7]人脐带间充质干细胞的生物学特性及向神经样细胞分化的研究[J]. 马廉,崔冰琳,冯学永,罗敏洁,蒋学武,杨立业,谢庆东,黄天华. 中华儿科杂志. 2006(07)
[8]人脐带间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的评价[J]. 王革生,张庆俊,韩忠朝. 中华神经外科杂志. 2006(01)
[9]Human umbilical cord Wharton’s Jelly-derived mesenchymal stem cells differentiation into nerve-like cells[J]. MA Lian, FENG Xue-yong, CUI Bing-lin, Frieda Law, JIANG Xue-wu,YANG Li-ye, XIE Qing-dong and HUANG Tian-huaDepartment of Pediatrics, Second Affiliated Hospital of Shantou University Medical College , Shantou 515041, China Shantou University Medical College, Shantou 515041,China Department of Neurosurgery, Chaozhou Central Hospital, Chaozhou 521021, China Research Center for Reproductive Medicine of Shantou University Medical College, Shantou 515041, China. Chinese Medical Journal. 2005(23)
[10]Regulation of spermatogenesis by paracrine/autocrine testicular factors[J]. Mahmoud Huleihel,Eitan Lunenfeld. Asian Journal of Andrology. 2004(03)
本文编号：3432079
【文章来源】：汕头大学广东省
【文章页数】：60 页
【学位级别】：硕士
【部分图文】：
RT一PCR检测HUMSCS在条件诱导液诱导下表达精原干细胞特异标记;A:诱导后第3
图gA:转染PIREsZ一EGFP质粒后绿色荧光蛋白在I侧队SCs中的表达;B:移植1月后俐MSCs在不育小鼠翠丸内定植，绿色为移植的扭服SCS，蓝色为DAPI染色的小鼠翠丸细胞核。FiguregA:ExPressionofEGFPinHUMSCsafterlabeledwithPIRESZ一EGFP:B:HUMSCsapPearedinthetestesofreeiPientmieeafter1monthtransPlantation，transPlantedeellshowngreenandnucleiareshowninblue，DApl(4’，6’一diamidino一2一Phenylindole)staining.magnifieation:x2003.人生殖细胞相关标记在小鼠翠丸内的表达将移植7天，30天及未移植细胞的小鼠肇丸取出，提取RNA，RT-PCR检测到未移植的细胞及移植细胞7大后的小鼠翠丸不表达人的生殖细胞标记，而移植了HUMSCSI月后的小鼠翠丸内表达有人的生殖细胞标记Stella、dazl(图10)，人精子作为阳性对照。D八之LU7D.1阴SPMU7D，阴SPM
30天及未移植细胞的小鼠肇丸取出，提取RNA，RT-PCR检测到未移植的细胞及移植细胞7大后的小鼠翠丸不表达人的生殖细胞标记，而移植了 HUMSCSI月后的小鼠翠丸内表达有人的生殖细胞标记Stella、dazl(图10)，人精子作为阳性对照。D八之L U7D.1阴 SPMU7D，阴SPM图10将HUMSCs移植于不育小鼠翠丸后7天、1月取小鼠翠丸行Rf-PCR检测人生殖细胞标记stella、daZI表达情况，M(marker)、sP(人精子)、7D、IM(移植7大、l月)、u(未移植)。 Figure10Rf-PCRdetectedhumanmalegermeellmarkerstella、 dazlexPressedinthemice testesafter7dayand1month’ 5transPlantationofHUMSCs.M:marker， SP:humansPerm，7D:7day， IM:1month，U:untransPlant.
【参考文献】：
期刊论文
[1]体内诱导人脐带间充质干细胞向男性生殖细胞分化的实验研究[J]. 林丽敏,吴小英,马廉,唐秋灵,林广裕,黄天华,谢庆东. 中国输血杂志. 2009(03)
[2]人脐带间充质干细胞生物学特性及向类肝细胞的分化[J]. 闫俊卿,韩涛,朱争艳. 世界华人消化杂志. 2008(15)
[3]人脐带间充质干细胞向胰岛样细胞的分化[J]. 王爱红,何红燕,罗敏洁,黄天华,马廉,马桂霞,林丽敏,林广裕,史雪川. 中国组织工程研究与临床康复. 2008(21)
[4]人脐带间充质干细胞分化为胰岛β细胞的实验研究[J]. 马桂霞,何红燕,罗敏洁,黄天华,肖升平,崔冰琳,马廉. 实用儿科临床杂志. 2008(08)
[5]脐带间充质干细胞在精原细胞培养条件下的生殖细胞特性[J]. 唐秋灵,何红燕,林广裕,林丽敏,谢庆东,黄天华,马廉. 实用儿科临床杂志. 2008(05)
[6]人脐带间充质干细胞向心肌样细胞分化的研究[J]. 林晓波,何红燕,罗敏洁,崔冰琳,冯学永,蒋学武,谢庆东,黄天华,应文娟,马廉. 实用儿科临床杂志. 2007(13)
[7]人脐带间充质干细胞的生物学特性及向神经样细胞分化的研究[J]. 马廉,崔冰琳,冯学永,罗敏洁,蒋学武,杨立业,谢庆东,黄天华. 中华儿科杂志. 2006(07)
[8]人脐带间充质干细胞移植对大鼠脊髓损伤神经功能恢复的评价[J]. 王革生,张庆俊,韩忠朝. 中华神经外科杂志. 2006(01)
[9]Human umbilical cord Wharton’s Jelly-derived mesenchymal stem cells differentiation into nerve-like cells[J]. MA Lian, FENG Xue-yong, CUI Bing-lin, Frieda Law, JIANG Xue-wu,YANG Li-ye, XIE Qing-dong and HUANG Tian-huaDepartment of Pediatrics, Second Affiliated Hospital of Shantou University Medical College , Shantou 515041, China Shantou University Medical College, Shantou 515041,China Department of Neurosurgery, Chaozhou Central Hospital, Chaozhou 521021, China Research Center for Reproductive Medicine of Shantou University Medical College, Shantou 515041, China. Chinese Medical Journal. 2005(23)
[10]Regulation of spermatogenesis by paracrine/autocrine testicular factors[J]. Mahmoud Huleihel,Eitan Lunenfeld. Asian Journal of Andrology. 2004(03)
本文编号：3432079
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