肺炎支原体LAMPs经PI3K/Nrf2诱导人单核细胞表达HO-1
发布时间：2021-10-22 02:55
目的探讨肺炎支原体（Mycoplasma pneumoniae,Mp）脂质相关膜蛋白（lipid-associated membrane protein,LAMPs）对人单核细胞表达血红素氧合酶-1（heme oxygenase-1,HO-1）的影响,并探讨可能的调控机制。方法体外培养THP-1细胞,用不同浓度的LAMPs作用后,分别采用realtime-PCR和Western blot检测HO-1mRNA和蛋白的表达。同时采用不同浓度的放线菌素D（ActD）和放线菌酮（CHX）预处理细胞,观察其对HO-1表达的影响,以证实HO-1的表达是否通过转录和翻译水平;提取LAMPs作用前后的核蛋白,凝胶迁移率实验检测Nrf2的核转位、Western blot检测Akt的磷酸化情况;同时采用PI3K抑制剂LY294002处理细胞,观察其对LAMPs诱导Nrf2核转位及HO-1表达的影响;最后采用siRNA干扰Nrf2表达,以证实Nrf2是否参与调控HO-1表达。结果 （1）05μg/mL LAMPs能以剂量依赖性方式诱导THP-1表达HO-1mRNA和蛋白;（2）5μg/...
【文章来源】：中国人兽共患病学报. 2015,31(04)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
图１不同浓度ＬＡＭＰｓ对ＬＤＨ漏出的影响Ｆｉｇ．１ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｒｅｌｅａｓｅｏｆＬＤＨｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ＴＨＰ－１细胞ＨＯ－１ｍＲＮＡ表达的影响Ｆｉｇ．２ＥｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｎＨＯ－１ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＴＨＰ－１ｃｅｌｌｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＬＡＭＰｓ２．３ＬＡＭＰｓ诱导ＴＨＰ－１细胞表达ＨＯ－１蛋白Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ显示，不同浓度ＬＡＭＰｓ作用ＴＨＰ－１细胞１６ｈ后，可明显诱导ＨＯ－１蛋白表达，其含量与ＬＡＭＰｓ的浓度呈一定的剂量依赖性（图３）。图３不同浓度ＬＡＭＰｓ对ＨＯ－１蛋白表达的影响Ｆｉｇ．３ＩｍｐａｃｔｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＯ－１ｐｒｏｔｅｉｎｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＬＡＭＰｓ２．４ＬＡＭＰｓ经持续的转录和翻译诱导ＨＯ－１表达ＴＨＰ－１细胞经不同浓度的放线菌素（ＡｃｔＤ，转录抑制剂）和放线菌酮（ＣＨＸ，翻译水平抑制剂）作用后，可显著抑制ＬＡＭＰｓ诱导ＴＨＰ－１细胞表达ＨＯ－１（图４Ａ、Ｂ）。２．５ＬＡＭＰｓ诱导ＴＨＰ－１细胞表达与ＰＩ３Ｋ有关ＬＡＭＰｓ作用１５ｍｉｎ后Ａｋｔ磷酸化到达高峰，随后随之降低。而总Ａｋｔ在所有处理组中保持恒定（图５Ａ）。此外，采用ＰＩ３Ｋ抑制剂ＬＹ２９４００２预处理ＴＨＰ－１细胞后，可显著降低ＬＡＭＰｓ诱导ＨＯ－１的表达（图５Ｂ）。图４放线菌素Ｄ和放线菌酮对ＴＨＰ－１细胞ＨＯ－１表达的影响Ｆｉｇ．４ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＯ－１ｐｒｏｔｅｉｎｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＡｃ
４期刘艳等：肺炎支原体ＬＡＭＰｓ经ＰＩ３Ｋ／Ｎｒｆ２诱导人单核细胞表达ＨＯ－１图５ＬＡＭＰｓ对ＴＨＰ－１细胞Ａｋｔ磷酸化的影响Ｆｉｇ．５ＥｆｆｅｃｔｏｆＡｋｔｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｉｎＴＨＰ－１ｃｅｌｌｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＬＡＭＰｓ２．６ＬＡＭＰｓ增强ＴＨＰ－１细胞Ｎｒｆ２ＤＮＡ结合活性ＬＡＭＰｓ处理３０ｍｉｎ尚不能检测出Ｎｒｆ２ＤＮＡ结合活性的变化，６０ｍｉｎ后开始增强，１２０ｍｉｎ后达到高峰。未标记Ｎｒｆ２探针可使ＤＮＡ－蛋白结合形成的滞后条带消失，而ＮＦ－κＢ探针对其无明显影响。此外，采用ＰＩ３Ｋ抑制剂ＬＹ２９４００２处理后，Ｎｒｆ２ＤＮＡ结合活性显著降低。见图６。２．７干扰Ｎｒｆ２表达抑制ＬＡＭＰｓ诱导ＴＨＰ－１细胞表达ＨＯ－１采用ｓｉＲＮＡ干扰Ｎｒｆ２表达后，再用ＬＡＭＰｓ刺激ＴＨＰ－１细胞１６ｈ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示，ＨＯ－１的表达显著降低（图７）。图６ＬＡＭＰｓ经ＰＩ３Ｋ增强Ｎｒｆ２ＤＮＡ结合活性Ｆｉｇ．６ＬＡＭＰｓｃｏｕｌｄｒａｉｓｅｔｈｅＤＮＡ－ｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＮｒｆ２ｖｉａＰＩ３Ｋｐａｔｈｗａｙｓ图７ｓｉＲＮＡ干扰Ｎｒｆ２表达后对ＨＯ－１表达的影响Ｆｉｇ．７ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＯ－１ｐｒｏｔｅｉｎａｆｔｅｒｓｉｌｅｎｃｉｎｇｏｆＮｒｆ２ｂｙｓｉＲＮＡ３讨论机体感染支原体后，单核巨噬细胞通过其表面的ＴＬＲ识别，并经ＭｙＤ８８／ＴＲＡＦ６／ＮＦ－κＢ信号通路诱
【参考文献】：
期刊论文
[1]内皮细胞和平滑肌细胞氧化应激时Nrf2／ARE信号通路对抗氧化基因表达的调控:与动脉粥样硬化和先兆子痫的关系[J]. Giovanni E．Mann,J（o|¨）rg Niehueser-Saran,Alan Watson,Tetsuro Ishii,Patricia de Winter,Richard C．M．Siow. 生理学报. 2007(02)
[2]Interactions between mycoplasma lipid-associated membrane proteins and the host cells[J]. YOU Xiao-xing, ZENG Yan-hua, WU Yi-mou (Institute of Pathogenic Biology, School of Medicine, Nanhua University, Hengyang 421001, China). Journal of Zhejiang University Science. 2006(05)
[3]Activation of nuclear factor κB and induction of inducible nitric oxide synthase by lipid-associated membrane proteins isolated from Mycoplasma penetrans[J]. 曾焱华,吴移谋,张文波,余敏君,朱翠明,谭立志. Chinese Medical Journal. 2004(07)
本文编号：3450241
【文章来源】：中国人兽共患病学报. 2015,31(04)北大核心CSCD
【文章页数】：5 页
【部分图文】：
图１不同浓度ＬＡＭＰｓ对ＬＤＨ漏出的影响Ｆｉｇ．１ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｒｅｌｅａｓｅｏｆＬＤＨｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ
ＴＨＰ－１细胞ＨＯ－１ｍＲＮＡ表达的影响Ｆｉｇ．２ＥｆｆｅｃｔｏｆｄｉｆｆｅｒｅｎｔｔｉｍｅｓａｎｄｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓｏｎＨＯ－１ｍＲＮＡｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｉｎＴＨＰ－１ｃｅｌｌｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＬＡＭＰｓ２．３ＬＡＭＰｓ诱导ＴＨＰ－１细胞表达ＨＯ－１蛋白Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ显示，不同浓度ＬＡＭＰｓ作用ＴＨＰ－１细胞１６ｈ后，可明显诱导ＨＯ－１蛋白表达，其含量与ＬＡＭＰｓ的浓度呈一定的剂量依赖性（图３）。图３不同浓度ＬＡＭＰｓ对ＨＯ－１蛋白表达的影响Ｆｉｇ．３ＩｍｐａｃｔｏｎｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＯ－１ｐｒｏｔｅｉｎｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｏｆＬＡＭＰｓ２．４ＬＡＭＰｓ经持续的转录和翻译诱导ＨＯ－１表达ＴＨＰ－１细胞经不同浓度的放线菌素（ＡｃｔＤ，转录抑制剂）和放线菌酮（ＣＨＸ，翻译水平抑制剂）作用后，可显著抑制ＬＡＭＰｓ诱导ＴＨＰ－１细胞表达ＨＯ－１（图４Ａ、Ｂ）。２．５ＬＡＭＰｓ诱导ＴＨＰ－１细胞表达与ＰＩ３Ｋ有关ＬＡＭＰｓ作用１５ｍｉｎ后Ａｋｔ磷酸化到达高峰，随后随之降低。而总Ａｋｔ在所有处理组中保持恒定（图５Ａ）。此外，采用ＰＩ３Ｋ抑制剂ＬＹ２９４００２预处理ＴＨＰ－１细胞后，可显著降低ＬＡＭＰｓ诱导ＨＯ－１的表达（图５Ｂ）。图４放线菌素Ｄ和放线菌酮对ＴＨＰ－１细胞ＨＯ－１表达的影响Ｆｉｇ．４ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＯ－１ｐｒｏｔｅｉｎｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＡｃ
４期刘艳等：肺炎支原体ＬＡＭＰｓ经ＰＩ３Ｋ／Ｎｒｆ２诱导人单核细胞表达ＨＯ－１图５ＬＡＭＰｓ对ＴＨＰ－１细胞Ａｋｔ磷酸化的影响Ｆｉｇ．５ＥｆｆｅｃｔｏｆＡｋｔｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｉｏｎｉｎＴＨＰ－１ｃｅｌｌｓｔｒｅａｔｅｄｗｉｔｈＬＡＭＰｓ２．６ＬＡＭＰｓ增强ＴＨＰ－１细胞Ｎｒｆ２ＤＮＡ结合活性ＬＡＭＰｓ处理３０ｍｉｎ尚不能检测出Ｎｒｆ２ＤＮＡ结合活性的变化，６０ｍｉｎ后开始增强，１２０ｍｉｎ后达到高峰。未标记Ｎｒｆ２探针可使ＤＮＡ－蛋白结合形成的滞后条带消失，而ＮＦ－κＢ探针对其无明显影响。此外，采用ＰＩ３Ｋ抑制剂ＬＹ２９４００２处理后，Ｎｒｆ２ＤＮＡ结合活性显著降低。见图６。２．７干扰Ｎｒｆ２表达抑制ＬＡＭＰｓ诱导ＴＨＰ－１细胞表达ＨＯ－１采用ｓｉＲＮＡ干扰Ｎｒｆ２表达后，再用ＬＡＭＰｓ刺激ＴＨＰ－１细胞１６ｈ，Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示，ＨＯ－１的表达显著降低（图７）。图６ＬＡＭＰｓ经ＰＩ３Ｋ增强Ｎｒｆ２ＤＮＡ结合活性Ｆｉｇ．６ＬＡＭＰｓｃｏｕｌｄｒａｉｓｅｔｈｅＤＮＡ－ｂｉｎｄｉｎｇａｃｔｉｖｉｔｙｏｆＮｒｆ２ｖｉａＰＩ３Ｋｐａｔｈｗａｙｓ图７ｓｉＲＮＡ干扰Ｎｒｆ２表达后对ＨＯ－１表达的影响Ｆｉｇ．７ＥｆｆｅｃｔｏｆｔｈｅｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎｏｆＨＯ－１ｐｒｏｔｅｉｎａｆｔｅｒｓｉｌｅｎｃｉｎｇｏｆＮｒｆ２ｂｙｓｉＲＮＡ３讨论机体感染支原体后，单核巨噬细胞通过其表面的ＴＬＲ识别，并经ＭｙＤ８８／ＴＲＡＦ６／ＮＦ－κＢ信号通路诱
【参考文献】：
期刊论文
[1]内皮细胞和平滑肌细胞氧化应激时Nrf2／ARE信号通路对抗氧化基因表达的调控:与动脉粥样硬化和先兆子痫的关系[J]. Giovanni E．Mann,J（o|¨）rg Niehueser-Saran,Alan Watson,Tetsuro Ishii,Patricia de Winter,Richard C．M．Siow. 生理学报. 2007(02)
[2]Interactions between mycoplasma lipid-associated membrane proteins and the host cells[J]. YOU Xiao-xing, ZENG Yan-hua, WU Yi-mou (Institute of Pathogenic Biology, School of Medicine, Nanhua University, Hengyang 421001, China). Journal of Zhejiang University Science. 2006(05)
[3]Activation of nuclear factor κB and induction of inducible nitric oxide synthase by lipid-associated membrane proteins isolated from Mycoplasma penetrans[J]. 曾焱华,吴移谋,张文波,余敏君,朱翠明,谭立志. Chinese Medical Journal. 2004(07)
本文编号：3450241
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