TLR4在anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF中的作用探讨

发布时间：2021-10-25 19:50

　　目的:Toll样受体（TLRs）不仅是参与天然免疫反应的重要受体,也是连接天然免疫和特异性免疫的桥梁。最新研究提示,TLRs及其信号转导途径可能参与抗磷脂综合征（APS）的病理机制。本论文重点探讨TLR4在抗磷脂抗体/抗原复合物（anti-β2GPI/β2GPI复合物）诱导单核细胞株THP-1细胞表达组织因子（tissue factor,TF）中的作用;以及TLR4的作用是否依赖细胞表面另一分子—膜联蛋白Ⅱ（Annexin A2,ANX2）。方法:①利用荧光定量PCR（Real-time PCR）检测anti-β2GPI/β2GPI诱导THP-1细胞TF mRNA的表达,采用试剂盒检测细胞TF活性。②利用自制的β2GPI胶联亲和层析柱（β2GPI-Affi-Gel）分析β2GPI与THP-1细胞表面相应受体结合情况。③Real-time PCR及Western蛋白印迹检测anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导细胞表达TLR4、MyD88（髓样分化因子88）、MD-2（髓样分化蛋白-2）情况。④观察TLR4途径抑制物—紫杉醇是否干预anti-β2GPI/β2GPI复合物对细胞的作用。... 

【文章来源】：江苏大学江苏省

【文章页数】：64 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
第一章 绪论
    1.1 TLRs的发现
    1.2 TLRs的结构与分布
    1.3 TLRs的配体
    1.4 TLRs的激活及信号转导机制
        1.4.1 MyD88依赖性信号转导途径
        1.4.2 MyD88非依赖性信号转导途径
    1.5 TLRs信号转导的负调控机制
    1.6 TLR家族成员在抗磷脂综合征病理机制形成中的作用
        1.6.1 抗磷脂综合征
        1.6.2 TLR4与抗磷脂综合征
        1.6.3 TLR2、TLR7和TLR8与抗磷脂综合征
    1.7 TLRs与其他疾病
        1.7.1 TLRs与系统性红斑狼疮
        1.7.2 TLRs与艾滋病(AIDS)
    1.8 结语
第二章 研究目的、方法、实验设计方案及意义
    2.1 研究目的
    2.2 研究方法
    2.3 实验设计方案
    2.4 研究意义
第三章 TLR4及相关信号分子MyD88和MD-2在anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF中的作用
    3.1 材料
        3.1.1 主要试剂
        3.1.2 其它试剂
        3.1.3 主要溶液
        3.1.4 主要仪器
    3.2 方法
        3.2.1 单核细胞株THP-1细胞的培养
        3.2.2 β2GPI亲和柱的制备
        3.2.3 β2GPI与THP-1细胞相应受体结合分析
        3.2.4 细胞总RNA的提取和逆转录
        3.2.5 Real-time PCR分析
        3.2.6 细胞总蛋白的提取及Western蛋白印迹
        3.2.7 TF活性检测
        3.2.8 统计学分析
    3.3 结果
        3.3.1 Anti-β2GPI/β2GPI诱导THP-1细胞表达TF mRNA及活性
        3.3.2 β2GPI与THP-1细胞相应受体结合
        3.2.3 Anti-β2GPI/β2GPI作用于THP-1细胞不同时间对TLR4、MyD88、MD-2表达的影响
        3.3.4 不同刺激物对THP-1细胞TLR4、MyD88及MD-2表达的影响
        3.3.5 不同浓度紫杉醇对anti-β2GPI/β2GPI诱导TLR4、MyD88及MD-2蛋白表达的影响
        3.3.6 1μmol/L紫杉醇对不同刺激物刺激THP-1细胞TLR4、MyD88、MD-2的表达的影响
        3.3.7 1μmol/L紫杉醇对不同刺激物刺激THP-1细胞TF表达的影响
    3.4 讨论
第四章 TLR4是否依赖ANX2在anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TF中起作用?
    4.1 材料
        4.1.1 主要试剂和仪器
    4.2 方法
        4.2.1 单核细胞株THP-1细胞的培养
        4.2.2 病毒感染
        4.2.3 干扰效率内源验证
        4.2.4 TLR4、MyD88、MD-2基因和蛋白水平达及TF活性的检测
        4.2.5 统计学分析
    4.3 结果
        4.3.1 细胞感染病毒后荧光的观察
        4.3.2 ANX2干扰效率验证
        4.3.3 ANX2 RNAi对anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TLR4、MyD88及MD-2 mRNA水平的影响
        4.3.4 ANX2 RNAi对anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导THP-1细胞表达TLR4、MyD88及MD-2蛋白水平的影响
        4.3.5 Anti-β2GPI/β2GPI复合物诱导ANX2 RNAi的THP-1细胞TF mRNA表达及TF活性
    4.4 讨论
第五章 主要结论及展望
    5.1 主要结论
    5.2 展望
致谢
参考文献
攻读硕士学位期间发表的文章、参加学术会议及参加或主持的课题


【参考文献】：
期刊论文
[1]APS IgG通过非Fc受体途径诱导血液单核细胞表达TF活性[J]. 周红,谷俊侠,许文荣.  中国免疫学杂志. 2003(08)



本文编号：3458064