一种自发胰岛素抵抗的3T3-L1脂肪细胞模型构建

发布时间：2021-10-29 07:18

　　本研究旨在突变3T3-L1细胞葡萄糖转运蛋白4（GluT4）的基因序列,造成GluT4功能障碍,从而获得一种稳定、自发胰岛素抵抗的脂肪细胞模型。利用CRISPR/Cas9技术对3T3-L1细胞的GluT4编码区进行定向切割,通过流式细胞术和基因测序筛选稳定突变的细胞株;使用CCK-8法检测所筛选细胞株的增殖活力;对细胞进行成脂诱导分化,油红O染色以判断细胞成脂分化能力;以胰岛素刺激下葡萄糖摄入量确定细胞对胰岛素的抵抗程度;qPCR和Western blot检测胰岛素抵抗细胞成脂分化过程中关键基因的表达。结果表明:第九外显子处13 bp的缺失导致3T3-L1细胞GluT4蛋白功能障碍,这一突变不影响细胞的增殖活力;成脂诱导分化过程中,该细胞株表现出严重且稳定的自发胰岛素抵抗,葡萄糖摄取受阻,与成脂分化和脂质合成相关的基因表达显著或极显著下调（P<0.05或P<0.01）。综上所述,GluT4功能障碍阻碍了脂肪细胞响应胰岛素的葡萄糖摄取,从而造成脂肪细胞产生自发的胰岛素抵抗;本研究从多个角度对该胰岛素抵抗脂肪细胞模型进行检测分析,验证了其稳定性和有效性,为脂肪营养代谢和胰岛素抵... 

【文章来源】：畜牧兽医学报. 2019,50(07)北大核心CSCD

【文章页数】：11 页

【文章目录】：
1 材料与方法
    1.1 材料
        1.1.1 细胞株、质粒载体及菌种
        1.1.2 试剂与仪器
    1.2 方法
        1.2.1 gRNA设计及切割效率验证
        1.2.2 稳定突变细胞株的筛选
        1.2.3 Western blot及细胞增殖活力检测
        1.2.4 成脂诱导分化
        1.2.5 葡萄糖摄取及三酰甘油释放量检测
        1.2.6 GluT4及糖脂代谢相关基因的转录检测
    1.3 统计学分析
2 结 果
    2.1 gRNA的选择
    2.2 稳定突变GluT4的细胞株筛选
    2.3 细胞的蛋白表达及细胞增殖活力
    2.4 成脂诱导分化
    2.5 葡萄糖消耗及三酰甘油释放量
    2.6 GluT4及糖脂代谢相关基因的转录检测
3 讨 论
4 结 论


【参考文献】：
期刊论文
[1]3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型研究现状[J]. 雷婷,涂珺.  江西中医药大学学报. 2018(03)
[2]葡萄糖转运蛋白GLUT4表达的调节机制[J]. 张楠,赵颖.  中国生物化学与分子生物学报. 2016(03)
[3]胰岛素诱导3T3-L1脂肪细胞胰岛素抵抗模型的建立[J]. 刘晓华,江湖,李海星,李超波,曹郁生.  食品科学. 2012(19)
[4]Berberine reverses free-fatty-acid-induced insulin resistance in 3T3-L1 adipocytes through targeting IKKβ[J]. Ping Yi, Department of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China Fu-Er Lu, Li-Jun Xu, Guang Chen, Kai-Fu Wang, Institute of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine, Tongji Hospital, Tongji Medical College, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430030, Hubei Province, China.  World Journal of Gastroenterology. 2008(06)



本文编号：3464218