1、整体重组酵母活菌治疗性疫苗抗HBV实验研究 2、人脐带血来源树突状细胞抗HBV治疗实验研究
发布时间：2021-10-29 07:25
目的：借助酵母菌的表达和免疫特性，利用基因工程技术构建表达乙型肝炎表面抗原及表面抗原与截短的热休克蛋白70的重组酵母菌，然后以整体活菌形式免疫BALB/C小鼠，作为一种针对HBV的治疗性疫苗，探索一种可有效活化机体抗HBV细胞免疫的免疫策略。方法：以基因工程技术构建内含HBsAg的重组啤酒酵母和毕赤酵母以及 HSP70（1-370）-HBsAg的重组毕赤酵母,以完整活菌形式于BALB/C小鼠皮下进行4次免疫后,用ELISA法检测其对乙型肝炎表面抗原的体液免疫及小鼠脾细胞与HBsAg共孵育后细胞因子的分泌情况；以[3H]掺入法测定小鼠脾细胞对HBsAg特异性的细胞增殖反应。结果：在两种重组酵母组中都成功诱导了小鼠体内乙型肝炎表面抗体的产生，显示乙型肝炎表面抗原抗原性并未受到影响。在重组啤酒酵母组中，通过[3H]掺入法可见HBsAg特异性的细胞增殖反应；在重组毕赤酵母组中，细胞因子检测结果显示重组毕赤酵母活菌可以诱导小鼠脾细胞分泌更多的IL-2，但对IL-4、γ-IFN的分泌无影响。结论：整体重组酵母活菌具有疫苗特性,可在小鼠体内激发体液免疫及一定程度的细胞免疫反应。重组酵母活菌用于激发机...
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：121 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
-8ELISA法分别检测酵母菌体裂解液和培养上清中HBsAg的表达结果
可稳定在这一水平（图 1-1-10）。以纯化 HBsAg 蛋白为标准品，建立标准曲线，可以推算出分别在诱导 18 小时和 30 小时的情况下，HBsAg 的表达量分别约为0.013ug/ml 和 0.006ug/ml（图 1-1-11）。Fig 1-1-8 ELISA result :HBsAg in supernatant of lysate and culture of recombinant yeast图 1-1-8 ELISA 法分别检测酵母菌体裂解液和培养上清中 HBsAg 的表达结果
重庆医科大学博士学位论文细胞计数后按 1×106/孔加入 96 孔圆底培养板。按加入刺激用 HBsAg 的量分为 4 组（总体积 200ul）：，即 0ug/ml、1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml。于 37℃，5%CO2孵育 60 小时，然后于每孔加入[3H]TdR（37kBq/孔），继续培养 12 小时，以细胞收集器收集细胞于玻璃纤维滤纸上，待干后，以液体闪烁计数仪测定 CPM 值。4、 统计学处理：采用 Microsoft Excel2000 中的 TTEST 函数进行异方差双样本检验。三． 实验结果1、 整体基因重组啤酒酵母的培养诱导：
【参考文献】：
期刊论文
[1]整体重组酵母抗乙型肝炎病毒的初步研究[J]. 曾彦,蔡大川,彭明利,任红. 中华肝脏病杂志. 2003(12)
[2]应用RNA干扰技术抑制乙型肝炎病毒抗原表达的实验研究[J]. 唐霓,黄爱龙,张秉强,闫歌. 中华医学杂志. 2003(15)
[3]宫内感染HBV免疫失败儿童Th1和Th2型细胞因子mRNA转录研究[J]. 王建设,朱启镕. 中华传染病杂志. 2003(02)
[4]树突状细胞体外激活的CTL杀伤效应[J]. 李用国,梁增伟,蔡大川,兰英华,周卫平,任红. 重庆医科大学学报. 2003(02)
[5]自体树突状细胞疫苗治疗慢性乙型肝炎的临床研究[J]. 李用国,陈敏,张大志,王志毅,曾维群,石小枫,郭渊,郭树华,任红. 中华肝脏病杂志. 2003(04)
[6]父婴传播的乙型肝炎病毒S基因进化树分析[J]. 王珊珊,李文玲,彭桂福,李珉珉,肖红,金惠玲,曾年华,王志斌,苏建新. 中华医学杂志. 2003(06)
[7]树突状细胞和巨噬细胞对肝癌细胞抗原的提呈作用[J]. 李用国,罗云萍,梁增伟,蔡大川,兰英华,谢群,任红. 中华肝脏病杂志. 2003(03)
[8]人脐血来源的树突状细胞的体外培养扩增[J]. 蔡大川,李用国,任红,梁增伟,罗云萍. 免疫学杂志. 2002(S1)
[9]树突状细胞HBsAg疫苗抗乙型肝炎病毒免疫的体外研究[J]. 李用国,罗云萍,兰英华,梁增伟,许红梅,任红. 中华传染病杂志. 2002(06)
[10]树突状细胞抗肿瘤临床治疗方案研究进展[J]. 蔡大川. 实用肿瘤杂志. 2002(06)
本文编号：3464228
【文章来源】：重庆医科大学重庆市
【文章页数】：121 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
-8ELISA法分别检测酵母菌体裂解液和培养上清中HBsAg的表达结果
可稳定在这一水平（图 1-1-10）。以纯化 HBsAg 蛋白为标准品，建立标准曲线，可以推算出分别在诱导 18 小时和 30 小时的情况下，HBsAg 的表达量分别约为0.013ug/ml 和 0.006ug/ml（图 1-1-11）。Fig 1-1-8 ELISA result :HBsAg in supernatant of lysate and culture of recombinant yeast图 1-1-8 ELISA 法分别检测酵母菌体裂解液和培养上清中 HBsAg 的表达结果
重庆医科大学博士学位论文细胞计数后按 1×106/孔加入 96 孔圆底培养板。按加入刺激用 HBsAg 的量分为 4 组（总体积 200ul）：，即 0ug/ml、1ug/ml、5ug/ml、10ug/ml。于 37℃，5%CO2孵育 60 小时，然后于每孔加入[3H]TdR（37kBq/孔），继续培养 12 小时，以细胞收集器收集细胞于玻璃纤维滤纸上，待干后，以液体闪烁计数仪测定 CPM 值。4、 统计学处理：采用 Microsoft Excel2000 中的 TTEST 函数进行异方差双样本检验。三． 实验结果1、 整体基因重组啤酒酵母的培养诱导：
【参考文献】：
期刊论文
[1]整体重组酵母抗乙型肝炎病毒的初步研究[J]. 曾彦,蔡大川,彭明利,任红. 中华肝脏病杂志. 2003(12)
[2]应用RNA干扰技术抑制乙型肝炎病毒抗原表达的实验研究[J]. 唐霓,黄爱龙,张秉强,闫歌. 中华医学杂志. 2003(15)
[3]宫内感染HBV免疫失败儿童Th1和Th2型细胞因子mRNA转录研究[J]. 王建设,朱启镕. 中华传染病杂志. 2003(02)
[4]树突状细胞体外激活的CTL杀伤效应[J]. 李用国,梁增伟,蔡大川,兰英华,周卫平,任红. 重庆医科大学学报. 2003(02)
[5]自体树突状细胞疫苗治疗慢性乙型肝炎的临床研究[J]. 李用国,陈敏,张大志,王志毅,曾维群,石小枫,郭渊,郭树华,任红. 中华肝脏病杂志. 2003(04)
[6]父婴传播的乙型肝炎病毒S基因进化树分析[J]. 王珊珊,李文玲,彭桂福,李珉珉,肖红,金惠玲,曾年华,王志斌,苏建新. 中华医学杂志. 2003(06)
[7]树突状细胞和巨噬细胞对肝癌细胞抗原的提呈作用[J]. 李用国,罗云萍,梁增伟,蔡大川,兰英华,谢群,任红. 中华肝脏病杂志. 2003(03)
[8]人脐血来源的树突状细胞的体外培养扩增[J]. 蔡大川,李用国,任红,梁增伟,罗云萍. 免疫学杂志. 2002(S1)
[9]树突状细胞HBsAg疫苗抗乙型肝炎病毒免疫的体外研究[J]. 李用国,罗云萍,兰英华,梁增伟,许红梅,任红. 中华传染病杂志. 2002(06)
[10]树突状细胞抗肿瘤临床治疗方案研究进展[J]. 蔡大川. 实用肿瘤杂志. 2002(06)
本文编号：3464228
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