人10号染色体长臂上两个新基因——N-RAP和MOB的克隆与功能分析

发布时间：2021-11-05 07:52

　　肌肉组织的发育及其功能由多种基因控制，基因功能失常则引发相应的疾病。肌肉发育相关基因的发现为肌肉疾病的诊断和治疗提供潜在的靶点，同时也为肌肉干细胞的增殖、分化及其应用提供指导，具有重要的理论价值和实际意义。小鼠伴肌动蛋白相关锚定蛋白（nebulin related anchoring protein，N-RAP）特异表达于骨骼肌和心肌组织，是肌纤维组装的引发中心。它在MLP（muscle LIM protein，MLP）敲除和tropomodulin转基因小鼠中的表达都上调，提示有可能作为扩张型心肌病（dilated cardiomyopathy，DCM）的早期标志。 我们获得了一条在胎儿和成人骨骼肌中差异表达的与小鼠N-RAP有86％相似性的新EST序列（GenBank登录号为BQ091951），它可能代表小鼠N-RAP基因在人类中的同源物。本研究利用生物信息学分析工具和分子生物学技术，从成人骨骼肌噬菌体cDNA文库中成功地克隆了人N-RAP基因的全长cDNA序列。人N-RAP基因cDNA序列含有一个5088bp的开放读码框，多聚腺苷酸加尾信号在第5375位（ATTAAA），第... 

【文章来源】：中国人民解放军军事科学院北京市

【文章页数】：92 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

用小鼠N~RAP基因全长cDNA序列搜索人类基因组数据库的结果

体序列有高度相似性，说明人类确实存在与小鼠入八尺通尸同源的基因(图1.1)。用小鼠入入尺通尸基因全长。DNA序列搜索人类EST数据库，发现有多条EST序列与小鼠刃场MP基因高度相似(图1.2)。根据对应的基因组序列、EST序列和我们获得的新EST序列，我们设计2对引物Pl、P2和P3、P4。用PCR方法，从成人骨骼肌噬菌体cDNA文库中分别获得了约Zkb(上游片段)和1.skb(下游片段)的特异条带，测序后拼接，发现并没有完整的开放读码框(ORF)。为此，将获得的约3.7kb片段搜索人类EST数据库(图1.3)和nr数据库(图1.4)，进行电子延伸，得到约5.4kb的电子延伸产物。据此设计引物P5、P6、P7和P8，进行巢式PCR

P2和P3、P4。用PCR方法，从成人骨骼肌噬菌体cDNA文库中分别获得了约Zkb(上游片段)和1.skb(下游片段)的特异条带，测序后拼接，发现并没有完整的开放读码框(ORF)。为此，将获得的约3.7kb片段搜索人类EST数据库(图1.3)和nr数据库(图1.4)，进行电子延伸，得到约5.4kb的电子延伸产物。据此设计引物P5、P6、P7和P8，进行巢式PCR，从成人骨骼肌噬菌体。DNA文库中获得了约5.Ikb的特异条带(图1.5)。

【参考文献】：
硕士论文
[1]吉富罗非鱼肝脏FAS、CAT基因的克隆及脂肪和胆碱、投饲率和投饲水平对其表达的影响[D]. 程远.广西大学 2015



本文编号：3477386