肺炎链球菌减毒活菌疫苗D39△CPS-TA的安全性、免疫保护效果及机制研究

发布时间：2021-11-14 06:19

　　目的：肺炎链球菌是一种革兰阳性条件致病菌，可引起肺炎、败血症、脑膜炎、中耳炎等多种急性感染性疾病，在全世界范围内特别是发展中国家具有极高的发病率和病死率。疫苗是预防肺炎链球菌感染的有效手段。但目前可用的荚膜多糖疫苗和荚膜多糖蛋白结合疫苗均存在生产成本高、可覆盖血清型有限及血清型置换等问题，极大地限制了这些疫苗在低收入国家的推广使用。因此近年来，新型肺炎链球菌疫苗一直是研究的热点。减毒活菌疫苗具有免疫原性强、血清型覆盖广、生产成本较低等特点，是一类具有发展潜力的疫苗，但其安全性必须重点考虑。本课题组在前期肺炎链球菌缺陷菌构建实验中得到了一株2型无荚膜的肺炎链球菌突变株D39△CPS-TA。该菌株由于spd1672缺失致细菌磷壁酸表达量显著减少，但其荚膜缺失的原因一直未知。该菌株高度减毒，高剂量感染不致小鼠死亡。我们尝试将其作为减毒活菌疫苗免疫小鼠，初步发现可以产生一定的保护作用，有望开发成商品化的减毒活菌疫苗。本研究拟在探索D39△CPS-TA荚膜缺失原因、明确D39△CPS-TA基因背景的基础上，系统性地评价其安全性和粘膜免疫小鼠的保护效果，并对其免疫保护机制进行深入研究，为该疫苗的进... 

【文章来源】：重庆医科大学重庆市

【文章页数】：104 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

D39△CPS-TA的荚膜多糖表达量Figure1-1.ExpressionofcapsularpolysaccharideofD39△CPS-TA

图 1-2 D39△ C PS-TA 与 D39 的 cps2A-2D 表达差异Figure 1-2. Different expression of cps2A-2D between D39 and D39△ 上：cps2A-2D 的荧光定量；下：对照基因 CbpA、LytA 和 NanA 的 D39△ CPS-TA 的 cps 基因簇上游调控序列点3713 导致调控基因表达量下调为了进一步证明的确是D39△CPS-TA的cps基因簇上游调控序C313713 引起了荚膜多糖合成基因 cps 表达量下降，我们将 D3 基因簇上游调控序列片段分别插入到 pAE03 质粒和 pEVP3 质粒别位于 GFP 上游和 LacZ 上游），利用 GFP 的表达量和 β-半乳映调控序列的调控能力。如果这段序列确实因为点突变而调控 的表达量减少，β-半乳糖苷酶的活性下降。

图 1-3 cps 基因簇上游调控序列片段扩增和重组质粒双酶切鉴定re 1-3. Apmplication of cps operon fragment and double enzyme digesidentification of recombinant plasmidPrimerStar 扩增目的片段，M 为 marker，1 为 D39, 2 为 D39△ CPS-重组质粒双酶切鉴定，M 为 marker，1 为 D39-cps-operon-pAE03，2-TA-cps-operon-pAE03，使用 EcoR I 和 Not I 双酶切；3 为 D39-cps-oper4 为 D39△ CPS-TA-cps-operon-pEVP3，使用 Sma I 和 BgI II 双酶切相邻两条泳带，左边为重组质粒未双酶切，右边为重组质粒双酶切 1-4 所示，与转化了 D39cps 基因簇上游调控序列片段的重组肺3-cps-operon 的 GFP 相比，转化了 D39△CPS-TA cps 基因簇上重组肺炎链球菌 D39-pAE03-cps-operon 的 GFP 表达量降低约 S-TA 的 cps 基因簇上游调控序列中的点突变 T→C313713 引起

【参考文献】：
硕士论文
[1]减毒活疫苗D39ΔCPS-TA对小鼠感染肺炎链球菌的保护效果和机制研究[D]. 姚润.重庆医科大学 2011



本文编号：3494118