白细胞介素-1β与皮质醇诱导人胎儿肺与羊膜成纤维细胞11β-HSD1表达的分子机制

发布时间：2021-11-12 23:48

　　胎儿器官成熟特别是肺成熟与分娩发动是一个协同进行的过程,而这一过程依赖于妊娠晚期内源性糖皮质激素的增加。由于人类胎儿肾上腺的特殊结构和胎盘糖皮质激素屏障的存在,妊娠晚期胎儿组织11β-羟基类固醇脱氢酶Ⅰ型（11β-Hydroxysteroid dehydrogenase type 1,11β-HSD1）对17-羟-11-脱氢皮质酮的活化作用可能成为胎儿体内糖皮质激素的重要来源。目前已有充分证据表明,大多数动物胎儿肺能够表达11β-HSD1,而且11β-HSD1-/-小鼠肺成熟出现障碍,提不11β-HSD1在胎儿肺成熟中的关键作用,但人胎儿组织特别是肺是否表达11β-HSD1目前还不明了。以往研究发现,人胎膜表达的11β-HSD1也为胎儿器官成熟提供重要的糖皮质激素来源,糖皮质激素和促炎性细胞因子作为抑炎和促炎的两种因子却都可以诱导胎膜11β-HSD1的表达,但其分子机制目前尚未阐明。本课题采用免疫组织化学、常规PCR、Western blotting、实时荧光定量PCR、酶活性测定、启动子克隆与活性测定、功能蛋白过表达、染色质免疫沉淀（ChIP）和凝胶电泳迁移实验（EMSA）等技术,首... 

【文章来源】：复旦大学上海市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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【学位级别】：博士

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图0-1糖皮质激素代谢酶llp一HsD作用示意图(引自AnthonyE.Michaeletal，ReProduction;2003:126，425.441)

1A26o=40.0林g/m!确定RNA的浓度，根据OD260/OD280比值判断RNA的纯度，OD260/OD280比值 1.8~2.0视为纯度高。同时进行凝胶电泳观察RNA是否降解(图1一1)。HFL一 1LungLiver 285rRNA18SfRNA图1一1琼脂糖凝胶检测人胎儿肺、肝组织和HFL一l细胞中提取的RNA是否降解;Fig.l一 1GelPictoresh()wedthequalityofRNAextraetedfromhumanfetal tissues(lungandliver)andhumanfetallungfibroblast(HFL一l). d)mRNA逆转录反应(反应体系30川):1.按测定RNA浓度计算后取1林g总RNA和1.5川oligodT(12一18)分别加入同一 0.5ml离心管中，并用nEPC水补足至总体积14林l;11.将离心管放入PCR仪中，按65℃ 5min和4℃15秒程序反应;111.暂停逆转录j泛应，各管加入混合液 17.5林 l(5XBuffer6林l， ZmMdNTp7.5林l)，42oC反应 2min;iv.加入逆转录酶1闪，依次按以下条件反应:42℃ 45min，70℃10 min

3.2人胎儿肺组织与胎肺成纤维细胞(HFL一 1)1lp一HSDI蛋白的表达免疫组织化学染色结果显示，妊娠期8个月胎儿肺小支气管和细支气管上皮细胞(图1一4A、B、C)、小支气管间质组织成纤维细胞(图1一4A、C)都有11p一HSDI蛋白表达，肺泡囊(图1一4D)和静脉内皮细胞(图1一4E)也表达11p一HSDI蛋白，而软骨组织则无11p一HsDI蛋白表达(图1一4A、B)。免疫组织化学染色阴性对照和妊娠期4个月胎儿肺组织中未能检测到明显的阳性染色(图l一4F、G)。


本文编号：3491882