内质网应激介导硫化氢对脂多糖致肝细胞凋亡的调节作用

发布时间：2017-05-09 17:01

  本文关键词：内质网应激介导硫化氢对脂多糖致肝细胞凋亡的调节作用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：探讨内质网应激(ERS)在硫化氢(H2S)调节脂多糖(LPS)诱导肝细胞凋亡中的作用；初步研究外源性H2S调节LPS诱导肝细胞ERS的分子机制。 方法：大鼠肝细胞系BRL细胞培养，用LPS、ERS诱导剂毒胡萝卜素(TG)、ERS抑制剂4-苯基丁酸(4-PBA)分别或组合处理BRL细胞；用小干扰RNA(siRNA)技术沉默H2S生成酶胱硫醚-β-合酶(CBS)及胱硫醚-γ-裂解酶(CSE)表达，H2S供体硫氢化钠(NaHS)与LPS共同处理肝细胞；分别用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)、KATP通道抑制剂格列苯脲(Gli)预处理细胞，再观察NaHS与LPS的作用。用去蛋白法检测细胞H2S含量；用MTT比色法或台盼蓝拒染法检测细胞活力；用Hoechst33258荧光染色确证细胞凋亡；用Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率；用Western blot检测ERS标志蛋白GRP78和ERS凋亡相关蛋白CHOP、caspase-12和caspase-3蛋白表达。 结果：与溶剂对照组比较，LPS可剂量和时间依赖性引起肝细胞活力显著降低、细胞凋亡率明显增加，诱导GRP78以及CHOP、caspase-12和caspase-3蛋白表达上调；TG本身可引起肝细胞活力降低和细胞凋亡增加，能显著加重LPS引起的肝细胞损伤；4-PBA可起细胞凋亡少量但明显增加，明显抑制了LPS引起的肝细胞凋亡增加；CBS siRNA、CSE siRNA能显著抑制静息肝细胞和LPS引起肝细胞内源性H2S生成，并抑制LPS引起肝细胞活力降低、细胞凋亡增加，翻转了LPS引起GRP78和CHOP、caspase-12和caspase-3蛋白表达上调；NAC预处理能明显降低LPS引起的细胞活力降低、凋亡增加以及GRP78和CHOP、caspase-12和caspase-3蛋白表达上调，与NaHS共同作用具有协同效应；Gli预处理能明显促进LPS引起的细胞活力降低、凋亡增加以及GRP78和CHOP、caspase-12和caspase-3蛋白表达上调，部分阻断NaHS对LPS引起ERS的拮抗作用。 结论：LPS通过引起氧化应激而诱导肝细胞ERS，ERS参与介导LPS诱导的肝细胞凋亡；在本实验条件下，内源性H2S上调、外源性H2S抑制LPS引起的肝细胞ERS，从而调节LPS诱导的肝细胞凋亡变化；外源性H2S通过增强抗氧化效应、开放KATP通道抑制LPS引起的ERS上调，，从而减少了LPS诱导的肝细胞凋亡增加；内、外源性H2S对LPS诱导肝细胞ERS的调节作用迥异，其机制有待进一步研究。
【关键词】：内质网应激 硫化氢 脂多糖 肝细胞 细胞凋亡
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 序言10-16
• 参考文献13-16
• 第一部分 内质网应激参与介导脂多糖诱导的肝细胞凋亡16-36
• 引言16-17
• 材料与方法17-24
• 结果24-26
• 讨论26-28
• 小结28
• 参考文献28-30
• 附图30-34
• 附表34-36
• 第二部分 硫化氢对脂多糖诱导肝细胞内质网应激的调节作用36-59
• 引言36-37
• 材料与方法37-42
• 结果42-45
• 讨论45-48
• 小结48
• 参考文献48-51
• 附图51-56
• 附表56-59
• 第三部分 外源性硫化氢调节脂多糖诱导肝细胞内质网应激的分子机制59-81
• 引言59-60
• 材料与方法60-62
• 结果62-66
• 讨论66-69
• 小结69
• 参考文献69-72
• 附图72-78
• 附表78-81
• 结论81-82
• 不足之处及今后研究方向82-83
• 综述83-93
• 参考文献90-93
• 缩略词中英文对照表93-94
• 攻读硕士学位期间发表的论文94-95
• 致谢95-96

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 韩业兴;谷振勇;丛斌;岑新海;刘东旭;刘晓;;挤压家兔后肢导致急性肝损伤和抗氧化能力降低[J];法医学杂志;2006年04期

2 刘俊;郝丹丹;朱依纯;;硫化氢对大鼠心脏成纤维细胞增殖的抑制作用[J];生理学报;2011年04期

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本文编号：352877