人骨髓来源间充质干细胞的外泌体特性研究

发布时间：2017-05-10 22:02

  本文关键词：人骨髓来源间充质干细胞的外泌体特性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：背景：间充质干细胞(MSC)来源于早期中胚层,是具有自我复制和多向分化潜能的成体干细胞,它存在于多种组织中。MSC可在特定的条件下诱导分化为骨髓基质细胞如成骨细胞、脂肪细胞、血管内皮细胞和心肌细胞等三个胚层细胞,已经成为组织工程和再生医学细胞治疗的主要候选干细胞之一。MSC具有低免疫原性和较强的免疫调节功能,可以应用于减少移植物的免疫排斥,研究肿瘤免疫,并可以用来治疗相关免疫疾病等方面。外泌体(exosome)是很小的囊泡,直径大约40-100nim,在生理或病理情况下,由多种细胞内膜(endosomal membrane)以出芽方式形成的多泡体,参与细胞间的信息交流,并参与到多种生理病理过程中。既往很多研究也已证明外泌体的治疗作用。现有研究已证明MSC分泌的外泌体可以减少心肌损伤范围、保护急性肾小管损伤、促进神经再生、减少肺损伤等方面有重要作用。有关MSC来源的外泌体的研究报道尚少,而对异基因MSC输注后在体内的增殖、分化、寿命以及以此带来的免疫调节功能的变化的认识尚不很明确,临床应用所产生的问题陷入瓶颈期。而对外泌体的生物特性与功能机制的深入研究对认识并解决MSC应用中产生的问题有重要作用,并且,外泌体的应用较之MSC直接应用更为安全,可以开启非细胞治疗的方法。 目的：本研究旨在探讨正常人骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMMSCs)分泌的外泌体(exosomes)免疫调节功能、支持血管形成、及造血支持能力。 方法：(1)采用贴壁、传代培养的方法从正常人骨髓组织中获取相对纯化的骨髓间充质干细胞；(2)收集BMMSC P4-P6代上清提取exosome,透射电镜观察其形态,蛋白印迹法检测其表面特异标志CD9, bicinchoninic acid (BCA)方法定量检测外泌体蛋白分泌量；(3) exosomes与正常人外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMCs)作用72小时后用酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测PBMC分泌的γ-干扰素(IFN-γ)；(4)实时定量PCR检测外泌体内免疫相关microRNA表达；(5)共聚焦显微镜观察外泌体与人脐带静脉内皮细胞human umbilical vein endothelial cells, HUVECs)的作用方式,与IUVEC共培养后观察其网状结构形成；裸鼠体内试验检测exosomes对血管形成能力的作用；(6)从脐带血中磁珠分离纯化CD34+造血干细胞,与exosomes共同培养一周后检测其对扩增CD34+细胞能力检测及CFU克隆形成实验。结果：正常人骨髓间充质干细胞分泌的外泌体近似圆形,直径在40nm-160nm之间,表达表面标志CD9,其蛋白分泌量与接种细胞数呈线性关系,可抑制PBMC分泌IFN-γ(P0.01),内含有免疫相关microRNA如miR301、 miR22、 miR-let-7a等,能促进HUVEC网状结构形成及血管形成。与脐血来源的CD34+造血干细胞共培养结果显示,BMMSCs外泌体具有明显扩增CD34+细胞能力和促进CFU克隆形成能力。 结论：BMMSC-exosome具有免疫调节功能、支持血管形成与造血支持作用。
【关键词】：骨髓间充质干细胞 外泌体 免疫调节 血管形成 造血
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 前言8-10
• 材料与方法10-28
• 结果28-37
• 讨论37-39
• 结论39-40
• 参考文献40-43
• 综述 间充质干细胞与其分泌的外泌体的生物学特性综述43-52
• 参考文献47-52
• 附录一 主要实验仪器和试剂52-56
• 附录二 主要溶液配制56-59
• 附录三 英文缩略语表59-61
• 附录四 在学期间发表文章61-62
• 致谢62-63

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 常静;雷寒;陈建斌;贾锋鹏;;人间充质干细胞免疫学性质的对比研究[J];临床心血管病杂志;2007年10期

  本文关键词：人骨髓来源间充质干细胞的外泌体特性研究，由笔耕文化传播整理发布。

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本文编号：355542