乙型脑炎病毒疫苗株包膜蛋白K138E回复突变对其神经毒力的影响
发布时间：2021-12-30 18:57
目的探索乙型脑炎疫苗株包膜蛋白（E蛋白）138位氨基酸向野毒株回复突变对其神经毒力与神经侵袭力的影响。方法采用重叠延伸PCR技术扩增含有K138E突变位点的DNA片段,构建乙脑疫苗株E蛋白K138E位氨基酸突变的病毒感染性克隆,体外转录病毒RNA,电转染BHK21细胞拯救病毒,绘制病毒生长曲线,采用蚀斑试验与测序鉴定突变病毒,通过动物试验评价突变病毒与疫苗株对昆明小鼠的神经毒力和神经侵袭力。结果酶切和测序表明K138E突变病毒感染性克隆构建成功,并通过电转染BHK21细胞包装得到K138E突变病毒。蚀斑试验显示突变病毒的蚀斑稍大于疫苗株,两株病毒的生长曲线与神经侵袭力无明显不同,但突变病毒神经毒力显著升高。结论乙脑疫苗株E138位氨基酸回复突变后神经毒力增强,E138位氨基酸是调控疫苗株神经毒力的重要位点。
【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2019,14(07)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
图１重叠延伸ＰＣＲ扩增Ｋ１３８Ｅ突变ＤＮＡ片段示意图Ｆｉｇ．１ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＫ１３８ＥｍｕｔａｎｔＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｂｙｏｖｅｒｌａｐｅｘｔｅｎｓｉｏｎＰＣＲ
析，编码Ｅ蛋白１３８位氨基酸的碱基由原来的ＡＡＡ变为ＧＡＡ，Ｋ１３８Ｅ突变病毒构建成功。１ＤＮＡ标志物（ＤＬ１５０００）２ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）３ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）经ＨｉｎｄＩＩＩ单酶切４ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）经ＢｇｌＩＩ单酶切５ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）经ＡｓｃＩ＋Ｘｈｏｌ双酶切６ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）经ＢｓｐＥＩ＋Ｘｈｏｌ双酶切７ＤＮＡ标志物（ＤＬ２０００）图４ＳＡ１４－１４－２（Ｋ１３８Ｅ）突变病毒感染性克隆ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）的酶切鉴定１ＤＮＡｍａｒｋｅｒ（ＤＬ１５０００）２ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）３ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）／ＨｉｎｄＩＩＩ４ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）／ＢｇｌＩＩ５ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）／ＡｓｃＩ＋Ｘｈｏｌ６ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）／ＢｓｐＥＩ＋Ｘｈｏｌ７ＤＮＡｍａｒｋｅｒ（ＤＬ２０００）Ｆｉｇ．４ＲｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｖｉｒａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｃｌｏｎｅｏｆＪＥＶＫ１３８Ｅｍｕｔａｎｔ图５ＳＡ１４－１４－２（Ｋ１３８Ｅ）突变株和疫苗株ＳＡ１４－１４－２的蚀斑比较Ｆｉｇ．５ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｈｅｐｌａｑｕｅｏｆＳＡ１４－１４－２（Ｋ１３８Ｅ）ａｎｄｔｈａｔｏｆｖａｃｃｉｎｅｓｔｒａｉｎ５ＪＥＶＥ蛋白Ｋ１３８Ｅ突变病毒的生长特性ＳＡ１４－１４－２（Ｋ１３８Ｅ）突变株培养２４ｈ后，病毒滴度达４．８
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【参考文献】：
期刊论文
[1]乙型脑炎重组痘苗病毒候选疫苗小鼠安全性评价[J]. 肖朋朋,刘昊,靖杰,温树波,韩继成,曹亮,李成辉,张金勇,南福龙,解长占,李一权,鲁会军,金宁一. 中国病原生物学杂志. 2018(11)
[2]乙型脑炎病毒E蛋白毒力关键位点的正向验证[J]. 范凤鸣,刘莉娜,孙艳,牟建超,陈智,杨欢,刘俐,刘杰,曾献武,杨会强. 中国生物制品学杂志. 2018(11)
[3]2012-2016年贵州省流行性乙型脑炎实验室监测病例特征分析[J]. 赵苏晔,叶绪芳,刘淳婷,刘铭. 中国病原生物学杂志. 2018(04)
[4]乙型脑炎疫苗株SA14-14-2包膜蛋白279位氨基酸回复突变对其毒力的影响[J]. 杨健,李玉华,李竹石,林华,汪伟,刘丽娜,倪谦枝,曾献武,杨会强. 川北医学院学报. 2013(04)
[5]乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2在乳鼠脑内连续传代后病毒基因的变化[J]. 吴永林,刘杰,杨会强,赵宇,汪伟,牟建超,黄玉仙,刘蓉,孙艳,俞永新,李玉华. 中国生物制品学杂志. 2007(01)
[6]流行性乙型脑炎减毒活疫苗的发展和应用[J]. 俞永新. 上海预防医学杂志. 2006(03)
本文编号：3558791
【文章来源】：中国病原生物学杂志. 2019,14(07)北大核心CSCD
【文章页数】：6 页
【部分图文】：
图１重叠延伸ＰＣＲ扩增Ｋ１３８Ｅ突变ＤＮＡ片段示意图Ｆｉｇ．１ＡｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆＫ１３８ＥｍｕｔａｎｔＤＮＡｆｒａｇｍｅｎｔｂｙｏｖｅｒｌａｐｅｘｔｅｎｓｉｏｎＰＣＲ
析，编码Ｅ蛋白１３８位氨基酸的碱基由原来的ＡＡＡ变为ＧＡＡ，Ｋ１３８Ｅ突变病毒构建成功。１ＤＮＡ标志物（ＤＬ１５０００）２ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）３ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）经ＨｉｎｄＩＩＩ单酶切４ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）经ＢｇｌＩＩ单酶切５ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）经ＡｓｃＩ＋Ｘｈｏｌ双酶切６ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）经ＢｓｐＥＩ＋Ｘｈｏｌ双酶切７ＤＮＡ标志物（ＤＬ２０００）图４ＳＡ１４－１４－２（Ｋ１３８Ｅ）突变病毒感染性克隆ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）的酶切鉴定１ＤＮＡｍａｒｋｅｒ（ＤＬ１５０００）２ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）３ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）／ＨｉｎｄＩＩＩ４ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）／ＢｇｌＩＩ５ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）／ＡｓｃＩ＋Ｘｈｏｌ６ｐＡＣＮＲ－ＪＥＶ（Ｋ１３８Ｅ）／ＢｓｐＥＩ＋Ｘｈｏｌ７ＤＮＡｍａｒｋｅｒ（ＤＬ２０００）Ｆｉｇ．４ＲｅｓｔｒｉｃｔｉｏｎｅｎｚｙｍｅｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｖｉｒａｌｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｃｌｏｎｅｏｆＪＥＶＫ１３８Ｅｍｕｔａｎｔ图５ＳＡ１４－１４－２（Ｋ１３８Ｅ）突变株和疫苗株ＳＡ１４－１４－２的蚀斑比较Ｆｉｇ．５ＣｏｍｐａｒｉｓｏｎｏｆｔｈｅｐｌａｑｕｅｏｆＳＡ１４－１４－２（Ｋ１３８Ｅ）ａｎｄｔｈａｔｏｆｖａｃｃｉｎｅｓｔｒａｉｎ５ＪＥＶＥ蛋白Ｋ１３８Ｅ突变病毒的生长特性ＳＡ１４－１４－２（Ｋ１３８Ｅ）突变株培养２４ｈ后，病毒滴度达４．８
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【参考文献】：
期刊论文
[1]乙型脑炎重组痘苗病毒候选疫苗小鼠安全性评价[J]. 肖朋朋,刘昊,靖杰,温树波,韩继成,曹亮,李成辉,张金勇,南福龙,解长占,李一权,鲁会军,金宁一. 中国病原生物学杂志. 2018(11)
[2]乙型脑炎病毒E蛋白毒力关键位点的正向验证[J]. 范凤鸣,刘莉娜,孙艳,牟建超,陈智,杨欢,刘俐,刘杰,曾献武,杨会强. 中国生物制品学杂志. 2018(11)
[3]2012-2016年贵州省流行性乙型脑炎实验室监测病例特征分析[J]. 赵苏晔,叶绪芳,刘淳婷,刘铭. 中国病原生物学杂志. 2018(04)
[4]乙型脑炎疫苗株SA14-14-2包膜蛋白279位氨基酸回复突变对其毒力的影响[J]. 杨健,李玉华,李竹石,林华,汪伟,刘丽娜,倪谦枝,曾献武,杨会强. 川北医学院学报. 2013(04)
[5]乙型脑炎病毒减毒株SA14-14-2在乳鼠脑内连续传代后病毒基因的变化[J]. 吴永林,刘杰,杨会强,赵宇,汪伟,牟建超,黄玉仙,刘蓉,孙艳,俞永新,李玉华. 中国生物制品学杂志. 2007(01)
[6]流行性乙型脑炎减毒活疫苗的发展和应用[J]. 俞永新. 上海预防医学杂志. 2006(03)
本文编号：3558791
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