Wnt/β-catenin信号途径在肌源性干细胞类神经分化中的作用

发布时间：2021-12-30 19:36

　　目的检测肌源性干细胞（muscle-derived stem cells，MDSCs）向类神经细胞分化过程中Wnt/β-catenin信号途径相关分子表达水平的变化。探讨Wnt/β-catenin信号途径在MDSCs分化过程中的调控作用。方法无菌条件下取大鼠后肢骨骼肌，将肌组织剪碎。三重酶消化肌肉组织，分离的细胞经差速贴壁法获取MDSCs。获取的MDSCs于培养箱中采用生长培养基培养，细胞传代培养至5～10代用于后续实验。实验分三组：对照组采用生长培养基单纯体外培养MDSCs；实验组采用含丙戊酸（valproic acid，VA）的生长培养基体外诱导培养MDSCs；抑制剂组在实验组诱导培养的基础上采用Dickkopf-1（DKK-1）和Frizzled蛋白家族（sFRP）抑制Wnt/β-catenin信号途径。诱导培养4天后，于倒置相差显微镜下观察各组细胞间形态差异。诱导培养1天和4天后，RT-PCR检测诱导分化过程中MDSCs内Wnt3a mRNA表达的变化。同时采用Western blot检测诱导分化过程中MDSCs内GSK-3β、β-catenin蛋白含量的变化。诱导培养4天后采... 

【文章来源】：锦州医科大学辽宁省

【文章页数】：45 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

MDSCs第1代，细胞贴壁生长呈短杆状或长梭形（×40）

、不同时间点三组 MDSCs 中 Wnt/β-catenin 信号途径达水平（一）Real-time PCR 检测 Wnt3a mRNA 表达水平接种于 24 孔板的细胞随机分为三组后采用不同方法培养，分别在培养 4 天后进行 RT-PCR 检测 Wnt3a mRNA 表达情况。在同一时点，实验Wnt3a mRNA 表达水平最高，抑制剂组其次，对照组最低。三组中两两均具有统计学意义。同时实验组和抑制剂组诱导 4 天后的表达水平高1 天后，差异有统计学意义。见图 2。

图 3-1 不同时间点三组 MDSCs 中 β-catenin 和 GSK-3β 蛋白质印迹。图 3-2 不同时间点三组 MDSCs 中 β-catenin 和 GSK-3β 的表达情况。注：A：对照组培养 1 天；B：实验组培养 1 天；C：抑制剂组培养 1 天；D：对照组培养 4 天；E：实验组培养 4 天；F：抑制剂组培养 4 天。所有数据采用表示。a,P＜ 0.05 与对照组相比；b,P＜0.05 与抑制剂组相比；c,P＜0.05 与 1 天相比。三、各组 MDSCs 的细胞形态

【参考文献】：
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本文编号：3558844