新生大鼠脊髓神经干细胞定向分化神经元的β-tubulin时空表达及相关因素研究

发布时间：2022-01-02 05:51

　　目的 神经干细胞具有增殖和分化能力，为神经系统损伤和退行性病变的治疗带来了希望，其目前的关键问题是神经干细胞定向分化的诱导。本研究旨在体外诱导神经干细胞定向分化为胆碱能神经元；探讨神经干细胞定向分化过程中突起生长机制。 本研究分3步进行。第一，分离、培养新生大鼠脊髓神经干细胞，加入NGF、IGF-1、胰岛素，观察此诱导因素是否使新生鼠脊髓神经干细胞定向分化为胆碱能神经元。 第二，探讨细胞骨架蛋白-β-微管蛋白（β-tubulin）在脊髓神经干细胞分化为神经元过程中的表达及意义。神经细胞发育过程中，细胞生长、迁移、轴突和树突的发出，把大分子物质和细胞器运送到其突起的分支以及轴突与其他神经细胞建立突触联系等，均与细胞骨架有关。我们已知，神经元中最丰富的骨架蛋白是β微管蛋白（β-tubulin）。因此，β-tubulin表达的时空变化，可为神经干细胞的定向分化研究提供重要依据。文献报道β-catenin可能与神经元轴突的早期生长有关。因此，结合β-catenin能更好地揭示神经元发育过程中的突起生长机制。 第三，跟踪观察突起生长锥中高表达的GAP-43在神经干细胞定向... 

【文章来源】：中国医科大学辽宁省

【文章页数】：68 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

新生大鼠脊髓神经干细胞培养神经球形成及其Nestin鉴定:A:神经干细胞增殖成神经球(40()x)

图2Nes6n分化第一日的神经千细胞N.眨n阳性反应。A:神经球最边缘的细胞呈梭形，反应弱阳性(400x)B:体积较大的画形细胞N“tin阳性反应(闷加x)。图3脊位神经干细饱N.石n布于细胞质中(N为细胞核，免疫电镜结果。5以刃K)。3A2:3AI:电于毯度离的N.眨n反应机泥物分一部分核膜出现锯齿状改变(lOKx)。3B:分化第1日后，核膜似绒毛状(15Kx)。。21.

电镜观察:可见电子密度高的Nestin阳性沉淀物分布于细胞质中，细胞体积小，核大，细胞质少(图3AI)，一部分核膜出现短小的锯齿状改变(图3A2);24k后，核旗的改变明显，核膜边界不清，有内凹部分，也有细小隆起，似绒毛状，细胞质增多，细胞开始伸出突起(图3B)了3.脊髓神经干细胞的定向分化结果加人含血清的培养基后，实验组和对照组细胞都迅速贴壁，开始长出突起。实验组细胞于刚贴壁的24小时内有细胞增殖现象，故常可观察到成堆的细胞，但两者细胞形态无明显差别。进行NSE免疫染色后，实验组可见较多的NSE阳性细胞

【参考文献】：
期刊论文
[1]细胞因子对神经干细胞增殖和分化的影响[J]. 张文治,苏心,秦进喜,孔繁明,孔建国,王新平,只达石.  临床与实验病理学杂志. 2003(01)
[2]神经生长因子受体TrkA在新生鼠、幼鼠及成鼠脊髓表达差异的研究[J]. 王永忠,张志坚,刘锦波,姜平,查小英.  神经解剖学杂志. 2002(04)
[3]神经干细胞的分离培养与鉴定[J]. 吕海侠,刘勇,李敏杰,丁海燕.  西安交通大学学报(医学版). 2002(05)
[4]整合素和细胞骨架在细胞力传导中的作用[J]. 杨芬,李莹辉.  航天医学与医学工程. 2002(04)
[5]Wnt与其他信号通路在胚胎发育过程中的crosstalk[J]. 白戈,唐珂,景乃禾.  生命的化学. 2002(04)
[6]IL-1β和胎牛血清对大鼠神经干细胞分化的影响[J]. 刘仕勇,张可成,杨辉,吕胜青.  中国组织化学与细胞化学杂志. 2000(04)
[7]心肌细胞骨架系统——微管的研究进展[J]. 徐峰,柏树令.  解剖科学进展. 2000(04)
[8]脊髓神经干细胞的培养和鉴定[J]. 孟晋宏,Udo Bartsch,Melitta Schachner,鞠躬.  第四军医大学学报. 2000(08)



本文编号：3563606