白色念珠菌感染兔模型中Sap2和Hsp90抗原抗体产生情况的研究

发布时间：2017-05-11 07:06

  本文关键词：白色念珠菌感染兔模型中Sap2和Hsp90抗原抗体产生情况的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：白色念珠菌是一种条件致病菌，是临床真菌感染中最常见的病原菌。目前,侵袭性白色念珠菌感染的发病率呈逐渐上升趋势,其发病机制复杂。近年来，临床白色念珠菌感染的比例明显增加，但是由于白色念珠菌感染情况复杂且缺乏明显的临床症状，导致检测困难。目前对于白色念珠菌感染的诊断还没有形成一种被广泛认可的，有效、简单、无创的病理学诊断方法。 Hsp90和Sap2是白色念珠菌重要的毒性分子，，能够诱导机体产生保护性抗体，在白色念珠菌感染过程中起着重要的作用。Sap2是一种蛋白水解酶，在感染的早期发挥作用，参与降解宿主组织、逃避免疫保护等。Hsp90是白色念珠菌感染后产生的毒性分子，作为分子伴侣，在白色念珠菌感染过程中发挥重要作用。近几年的研究表明Hsp90和Sap2在白色念珠菌的诊断、治疗和免疫保护等方面起着重要作用。 本实验利用课题组构建保存的pET28a-Sap2、pET28a-Hsp90原核表达载体，制备出了纯度较高的Hsp90和Sap2重组蛋白。利用制备的重组蛋白成功获得了特异性较高的多克隆抗体。选择体重相似的大耳白兔16只，向14只免疫抑制的实验组白兔耳缘静脉注1ml5107个白色念珠菌，向2只对照组注射1ml生理盐水，建立白色念珠菌感染动物模型。利用间接ELISA的方法检测了感染过程中兔体内抗体的变化情况，利用间接竞争ELISA的方法检测了抗原的变化。实验发现，对照组的Hsp90和Sap2抗原、抗体水平无显著变化，实验组在感染周期Hsp90和Sap2抗原及其抗体各自产生规律性的变化。通过分析两种抗原、抗体出现时间的特点，可以推断疾病的进展程度，对白色念珠菌的早期检测具有重要的意义
【关键词】：白色念珠菌感染 Sap2 Hsp90 抗原抗体检测
【学位授予单位】：东北师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R378
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-6
• 目录6-8
• 引言8-13
• 1．白色念珠菌感染8
• 2．白色念珠菌的两种免疫优势抗原——Sap2 和 Hsp908-11
• 2.1 Sap2 的研究现状8-9
• 2.2 Hsp90 的研究现状9-11
• 3.白色念珠菌感染检测的研究进展11-12
• 3.1 免疫学诊断方法11
• 3.2 分子生物学诊断方法11-12
• 4.本研究的内容及意义12-13
• 实验材料与方法13-19
• 1.实验材料13
• 2.实验仪器及试剂13-14
• 2.1 实验仪器13
• 2.2 常用生化试剂13-14
• 2.3 主要器械与耗材14
• 3.实验方法14-19
• 3.1 Sap2 和 Hsp90 重组蛋白的制备及纯化14-15
• 3.2 Sap2 和 Hsp90 重组蛋白的抗原性分析15
• 3.3 Sap2 和 Hsp90 多克隆抗体的制备及纯化15-16
• 3.4 白色念珠菌感染兔模型的构建16-17
• 3.5 血清中白色念珠菌 Sap2 和 Hsp90 抗原、抗体的检测17-19
• 实验结果与分析19-32
• 1. Sap2 和 Hsp90 重组蛋白的纯化及抗原性分析19-20
• 1.1 Sap2 和 Hsp90 重组蛋白的纯化19
• 1.2 Sap2 和 Hsp90 重组蛋白的抗原性分析19-20
• 2. Sap2 和 Hsp90 多克隆抗体的效价测定及纯化20-23
• 2.1 抗 Sap2 和 Hsp90 血清效价的测定20-22
• 2.2 Sap2 和 Hsp90 多克隆抗体的纯化22
• 2.3 多克隆抗体的特异性鉴定22-23
• 3. 利用 ELISA 方法测定白色念珠菌感染兔模型中 Sap2 和 Hsp90 抗原抗体产生情况23-32
• 3.1 成功构建白色念珠菌感染兔模型23
• 3.2 白色念珠菌感染兔模型中 Sap2 和 Hsp90 抗体产生规律的测定23-25
• 3.3 白色念珠菌感染兔模型中 Sap2 和 Hsp90 抗原产生规律的测定25-28
• 3.4 Sap2 抗原和抗体以及 Hsp90 抗原和抗体变化情况的综合分析28-32
• 讨论32-36
• 结论36-37
• 参考文献37-41
• 致谢41

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 赵丹慧,张艳,袁越,李成文;重组人骨形态发生蛋白-2抗体的制备及纯化[J];中国生物工程杂志;2005年07期

2 刘飞,金伯泉,朱勇,欧阳为明,张新海,谢鑫,陈丽华;Notch信号途径效应分子HES1的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定[J];细胞与分子免疫学杂志;2002年04期

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本文编号：356497