细胞微泡内的DNA组成与功能及其在动脉粥样硬化中的作用研究

发布时间：2022-01-04 00:24

　　背景：细胞间通讯可以确保组织内不同细胞的功能相互协调。细胞间通讯包括可溶性因子、隧道纳米管和细胞微泡等，它们都可以在不同细胞间水平传递细胞表面分子或细胞质。微泡是一种大多数细胞在生理或病理状态下都会分泌的圆形的质膜片断，包括外泌体和微粒或脱落小泡[1,2]。目前，对微泡的生物学功能了解甚少，有研究认为它主要参与细胞分泌、免疫调节、凝血、细胞间通讯等生理或病理过程[3-5]。微泡是一种亚细胞结构，其生成、丰度、大小、内含物和生物学功能等均存在异质性。微泡内含蛋白质、mRNA、miRNA等多种生物大分子[6-9]，表面还携带母体细胞来源的的抗原、脂质等，这些均有利于其在循环中与受体细胞融合，水平运输外源的蛋白质和核酸[10-13]，参与细胞间通讯并调节受体细胞的生物学功能[8,9,14,15]。此外，有研究报道微泡介导的细胞间通讯在动脉粥样硬化的形成中扮演了重要角色[15]。最近的研究发现微泡内含线粒体DNA和染色体DNA[16,17]。Waldenstrom等[17]进一步报道了在心肌细胞微泡内存在的染色体DNA可以转移至受体细胞的细胞质和细胞核内，但这些转移的微泡DNA是否具有功能并不... 

【文章来源】：中国人民解放军陆军军医大学重庆市

【文章页数】：107 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

细胞及其微泡流式细胞分析结果

图 2-3 血浆及细胞微泡中蛋白标志物的表达.3 讨 论基于上述研究我们发现，根据微泡本身特有的理化性质，通过多步差速离心法从血浆和细胞培养上清液中成功分离微泡，该方法与之前的报道一致[8, 9, 15]。负染电镜检查与流式细胞术均发现在微泡内存在致密结构，可能为核酸、蛋白等生物子。由于流式细胞术不能区分小于200 nm的单个颗粒，这一局限使我们应用此技检测分析了大于200 nm的微泡颗粒，但这一方法在之前已有明确的报道[18SG101、Flotillin-1和HSP70等与微泡的生成和释放密切相关，CD63为细胞微泡的成分，AGO2为细胞微泡内miRNA的共连接蛋白[15]，因此，检测这些微泡相关蛋够正确反应微泡的存在。.4 小 结

前无明显变化，见图 3-1B。该结果进一步证实微泡携带的 DNA 并非来吸附的 DNA，而是来源于微泡内。3）同时，我们用亲脂性的膜染料 DiI 与微泡孵育后，其荧光检测信号较增强，如图 3-1C 所示，这进一步说明微泡的存在及其结构的完整性。.2.1.2 双色荧光激活细胞分选器检测微泡 DNA 结果了进一步证实微泡内存在 DNA，我们将 DNA 染料 AO 与微泡膜染料 D然后检测荧光信号以观察两种染料是否可以共染。如图 3-2 所示，共染 90%，较未染与单染微泡均明显增强，说明两种染料可以共染微泡，进泡内 DNA 的存在。.2.1.3 细胞存活率分析了证实微泡 DNA 并非来源于凋亡/死亡细胞残留的 DNA，根据 PI 染料胞结合而不与存活细胞结合的特点，我们使用 PI 染料检测分离微泡前平活率。如图 3-3 所示，平滑肌细胞在 PI 染色前后检测信号无明显变化，胞为存活的细胞，它所分泌的微泡所携带 DNA 并非来源于凋亡或死亡的


本文编号：3567273