猪附红细胞体重组DNA疫苗pVAX1-ORF2的构建及实验免疫研究

发布时间：2017-05-12 16:22

  本文关键词：猪附红细胞体重组DNA疫苗pVAX1-ORF2的构建及实验免疫研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 构建猪附红细胞体重组DNA疫苗pVAX1-ORF2，将重组DNA疫苗质粒接种于C57BL/6小鼠，检测C57BL/6血清中的特异性抗体IgG水平，脾T淋巴细胞亚类数量CD4+、CD8+，Th1\Th2类细胞因子IFN-γ、IL-4，探讨猪附红细胞体重组DNA疫苗pVAX1-ORF2诱导的免疫反应。为进一步进行猪附红细胞体重组DNA疫苗的临床实验研究乃至产业化生产奠定了基础。 方法 利用全基因合成技术获取猪附红细胞体AJ504999序列中ORF2基因片段，ORF2基因克隆入pMD18-T vector，，经测序正确后连接于真核表达载体pVAX1，构建含有目的基因的重组质粒pVAX1-ORF2。将C57BL/6小鼠随机分为3组，A组接种pVAX1-ORF2阳性重组质粒，B组接种pVAX1空质粒为阴性对照组，C组接种PBS为空白对照组，每次向C57BL/6小鼠的双侧后肢胫前肌注射100μg药液。共免疫3次，每次间隔1周。于第1次免疫后按0、1、2、3、4周断尾取血，取上清，-200C保存备抗体IgG检测用。于第4周断头取血，同时无菌取小鼠脾脏制备脾细胞悬液，用ELISA方法检测血清中特异性抗体IgG与Th1\Th2类细胞因子IFN-γ、IL-4水平变化，用流式细胞术分析脾T淋巴细胞亚类数量CD4+、CD8+。 结果 1、应用全基因合成技术获得了猪附红细胞体AJ504999中ORF2基因。 2、成功构建了猪附红细胞体重组质粒pVAX1-ORF2。 3、在不同时间点采样对小鼠血清进行的抗体检测结果表明，重组质粒pVAX1-ORF2在第1次免疫小鼠后1周，即可检测出明显的IgG抗体，且最高值出现在第3次免疫后1周，所测OD450nm值均显著高于空载体pVAX1对照组和空白对照组（P0.05）；重组质粒pVAX1-ORF2免疫组的CD4+和CD8+的淋巴细胞百分数极显著高于空载体pVAX1对照组和空白对照组（P0.01），且CD4+/CD8+比值显著高于对照组（P0.05）；重组疫苗质粒pVAX1-ORF2免疫组小鼠较空载体pVAX1对照组分泌较高水平Th1\Th2类细胞因子IFN-γ、IL-4（P0.01）。与空载体pVAX1对照组和空白对照PBS组相比，重组疫苗质粒pVAX1-ORF2免疫组小鼠细胞因子IFN-γ、IL-4分泌水平极显著提高。 结论 1、猪附红细胞体ORF2蛋白具有规则的空间结构及较强的免疫原性。 2、猪附红细胞体ORF2基因片段在真核表达系统内成功表达构建重组体。 3、猪附红细胞体重组DNA疫苗质粒pVAX1-ORF2进行实验免疫研究表明，重组DNA疫苗pVAX1-ORF2使小鼠产生了IgG抗体，使CD4+和CD8+淋巴细胞数量增加，诱导小鼠产生特异性体液免疫和细胞免疫应答；pVAX1-ORF2疫苗免疫组小鼠在特异性抗原肽的刺激下分泌较高水平的Th1和Th2类细胞因子IL-4和IFN-γ。
【关键词】：猪附红细胞体 重组 DNA疫苗 pVAX1-ORF2 构建 免疫
【学位授予单位】：辽宁医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R392
【目录】：

• 中文论著摘要4-6
• 英文论著摘要6-9
• 英文缩略语表9-10
• 前言10-12
• 实验材料与方法12-22
• 实验结果22-30
• 讨论30-34
• 结论34-35
• 本研究创新性的自我评价35-36
• 参考文献36-39
• 综述39-49
• 参考文献46-49
• 在学期间科研成绩49-50
• 致谢50-51
• 个人简介51-52

【参考文献】

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1 鲍士荣;;新生儿缺氧缺血性脑病血清IgA、IgG、IgM及C3水平变化及其临床意义[J];蚌埠医学院学报;2008年04期

2 郑秀红;贾立军;李月梅;张守发;;猪附红细胞体亚单位疫苗对Balb/c小鼠的免疫试验[J];黑龙江畜牧兽医;2010年09期

3 张立树;金宁一;宋英今;孙岩松;王宏;战大伟;马鹤雯;尚玉璞;金洪涛;洪宝庆;李昌;;恒河猴对人工设计的HIV-1 DNA疫苗的免疫反应[J];科学通报;2006年10期

4 云霞,邰秀珍,杨殿相,杨海萍;内蒙古西部地区人群附红细胞体感染情况的调查与分析[J];内蒙古医学院学报;1997年03期

5 王瑞琳;金宁一;金洪涛;张立树;郑敏;金明兰;屈勇刚;;编码SARS-CoV S1和S2蛋白的DNA疫苗对小鼠的免疫应答[J];中国生物制品学杂志;2007年06期

6 巴彩凤;谢建中;宋立先;;猪附红细胞体感染小鼠血清IgG和IgE水平的变化[J];中国生物制品学杂志;2011年06期

7 温卫珊;阎建平;何春荣;吴水新;黄开华;;龙岩市人及动物附红细胞体感染情况调查[J];医学动物防制;2009年09期

8 杨慧兰;周翠;关蕾;赵举峰;樊建勇;;单纯疱疹病毒II型CTL表位DNA疫苗的Th1/Th2免疫应答研究[J];中国皮肤性病学杂志;2007年07期

9 尚德秋;李兰玉;裴标;王书义;刘荣海;赵恒(?);孙广久;唐宏卓;唐爱武;张吉周;孙二婷;刘志臣;刘贵;杨大德;刘锋朝;安华珍;梁琴;李建国;;附红细胞体感染人畜的流行病学调查(Ⅱ)[J];中华流行病学杂志;1996年04期

10 尚德秋,李兰玉,陆宙光,裴标,闫晶华,李明瑞,薛志清,林长民,高峻,张丽华,辛世昆,刘玉峨,刘玉枝,高蔚华,陶墨奎,颜永琦,程华芳,柴世忠,杨华,张进才,王多福,祁军;附红细胞体感染人畜的流行病学调查(Ⅲ)[J];中华流行病学杂志;1997年03期

  本文关键词：猪附红细胞体重组DNA疫苗pVAX1-ORF2的构建及实验免疫研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：360279