利用基因编辑技术TALEN建立K562细胞系FLT3/ITD敲入模型

发布时间：2022-01-23 20:32

　　类转录激活因子效应物核酸酶（Transcription activator-like effector nuclease, TALEN）是人工构建的序列特异性核酸内切酶的一种,它能够识别并切割特定的DNA靶序列,造成双链断裂,并引起基因组结构的定点改变。它2010年底成功应用于基因打靶,很快成为一种比锌指核酸酶（Zinc-finger nuclease, ZFN）更容易设计、特异性更高和毒性更低的人工核酸内切酶。本文将用举例的方法从TALEN的设计、构建及六种活性或突变效率检测方法来建立并完善TALEN平台,并从方法的难易程度及优缺点进行评估六种突变率检测方法和合适的应用范围。通过UA （Unit Assembly,单元组装）和Golden Gate Vector based Assembly方法合成TALEN质粒,并比较酶切,SSA检测系统,T7E1酶切加毛细血管电泳检测,加药T在检测以及单克隆检测等方法,比较构建及筛选的优缺点。我们成功构建了TANLEN质粒,并建立了较多的检测TALEN切割效果的方法,比较了各种方法的优缺点,找到合适的评估体系。我们推荐T7E1酶切试验作为早期筛选... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：129 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
第一部分 基因编辑技术TALEN的构建及其突变筛选体系的优化和比较
    摘要
    Abstract
    前言
    方法与步骤
    结果
    讨论
    参考文献
第二部分 利用基因编辑技术TALEN建立K562细胞系FLT3/ITD敲入模型
    摘要
    Abstract
    前言
    材料与方法
    结果
    讨论
    参考文献
第三部分 利用基因编辑技术TALEN建立K562细胞系中半敲除FLT3基因模型及其相关效应研究
    摘要
    Abstract
    前言
    材料与方法
    结果
    讨论
    参考文献
第四部分 综述 FLT3/ITD突变在急性髓系白血病中的作用
    参考文献
中英文缩略表
致谢


【参考文献】：
期刊论文
[1]类转录激活因子效应物核酸酶（TALEN）介导的基因组定点修饰技术[J]. 沈延,肖安,黄鹏,王唯晔,朱作言,张博.  遗传. 2013(04)



本文编号：3605100