Pristane诱导小鼠狼疮模型的建立及其免疫细胞功能变化的研究

发布时间：2017-05-13 14:14

  本文关键词：Pristane诱导小鼠狼疮模型的建立及其免疫细胞功能变化的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的建立Pristane诱导的小鼠系统性红斑狼疮(SLE)模型；观察该模型各器官组织的炎症病理变化特点；观察该模型各部位免疫细胞的组成变化；检测该模型淋巴细胞共刺激分子的表达及脾脏T细胞的活化程度；观察丝裂原(LPS和ConA)刺激对脾淋巴细胞免疫功能的影响。方法(一)狼疮模型的建立、生物学鉴定及其器官组织免疫和病理学检查：0.5mlPristane单次腹腔注射雌性BALB/c小鼠构建小鼠狼疮模型(对照组注射等量的生理盐水NS)；注射前及注射后每月ELISA法检测血清抗dsDNA抗体和抗Sm/RNP抗体含量，Albustix试纸法检测尿蛋白含量；6个月后处死全部小鼠，解剖、肉眼观察其胸、腹腔脏器组织病变情况，并取肝、脾、肺、肾、小肠及其他病变组织做HE染色观察其组织炎症病理变化；直接荧光染色法观察肾脏免疫复合物(IC)沉积及肝、肺和小肠组织T、B细胞浸润程度；半定量RT-PCR检测肝、肺和小肠组织炎症性细胞因子IL-6mRNA和Ⅰ型干扰素刺激基因(ISGs)Mx1mRNA的表达水平。(二)模型组小鼠免疫细胞组成和功能变化的研究：流式细胞术检测造模3个月时模型组小鼠脾脏T细胞的活化程度，造模3个月和6个月时脾脏T细胞表面共刺激分子CD28、CD154、CD137和B细胞表面共刺激分子CD40、CD137L的表达，以及造模6个月时外周血、脾脏和腹腔灌洗液中各免疫细胞的组成变化；RT-PCR检测造模6个月时脾脏CD137mRNA和CD137LmRNA的表达水平；流式细胞术检测造模6个月时模型组小鼠外周血和腹腔灌洗液中淋巴细胞表面共刺激分子的表达；MTT法和流式细胞术检测模型组小鼠脾淋巴细胞在丝裂原刺激下的增殖、活化、共刺激分子表达和凋亡。结果(一)模型组小鼠出现多种SLE样临床症状和体征，并发生肝、肺等器官组织炎症反应：模型组小鼠造模3个月～6个月时血清抗Sm/RNP抗体和4个月～6个月时血清抗dsDNA抗体较对照组明显增高(P0.01)；造模6个月时其蛋白尿(≥+)阳性率和关节病变阳性率均显著高于对照组(P0.01)；器官组织检查发现，造模6个月时50%的模型组小鼠出现不同程度的肾小球肾炎病变伴毛细血管壁大量IC沉积，且大多数模型组小鼠出现脾肿大，肝、肺和小肠组织T、B细胞浸润，IL-6mRNA和Mx1mRNA表达上调及腹腔产生大量脂肪肉芽肿结节等器官组织炎症反应，而对照组未见这些病变。(二)模型组小鼠免疫细胞组成和功能明显异常：与对照组相比，造模3个月时模型组小鼠脾脏T细胞明显活化(P0.05)；造模6个月时模型组小鼠脾脏中T、B细胞明显减少(P0.05)，，浆细胞明显增多(P0.05)，外周血树突状细胞和浆细胞明显增多(p0.05)，腹腔灌洗液中T细胞、浆细胞和树突状细胞明显增多(P0.05)，B细胞明显减少(P0.05)，且各部位成熟树突状细胞均明显增多(P0.05)；造模6个月时模型组小鼠脾脏T细胞上CD28表达明显减少(P0.05)，CD137表达明显增多(P0.01)，B细胞上CD40表达明显减少(P0.01)，CD137L表达明显增多(P0.05)，且其脾脏CD137mRNA和CD137LmRNA表达上调；造模6个月时模型组小鼠外周血淋巴细胞上述几种共刺激分子的表达与脾脏基本一致，而腹腔灌洗液中T细胞表达CD28不是减少而是明显增多(P0.05)；模型组小鼠脾淋巴细胞在丝裂原刺激下的增殖、活化和凋亡均较对照组明显增强(P0.05)，且丝裂原刺激不能纠正模型组小鼠脾淋巴细胞表面所有共刺激分子的表达异常。结论Pristane能成功诱发BALB/c小鼠SLE；Pristane能诱导狼疮鼠出现明显的器官组织炎症性病变；Pristane诱导的狼疮鼠免疫细胞组成及淋巴细胞增殖、活化、表面共刺激分子表达及凋亡明显异常。
【关键词】：Pristane 小鼠 狼疮模型 炎症 共刺激分子
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R593.241;R-332
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 前言10-13
• 材料与仪器13-15
• 实验方法15-25
• 实验结果25-45
• 讨论45-49
• 结论49-50
• 参考文献50-56
• 致谢56-57
• 附录57-73
• A、系统性红斑狼疮诊断标准57-58
• B、英文缩略词表58-59
• C、常用试剂配制59-60
• D、个人简历及发表的文章60-61
• E、综述61-73
• 参考文献68-73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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  本文关键词：Pristane诱导小鼠狼疮模型的建立及其免疫细胞功能变化的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：362773