miR-106b靶向调控胰岛素产生细胞诱导过程中Ngn3基因的表达

发布时间：2017-05-13 16:17

  本文关键词：miR-106b靶向调控胰岛素产生细胞诱导过程中Ngn3基因的表达，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 探讨小鼠骨髓间质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BMMSCs）向胰岛素产生细胞（insulin-secreting cells， ISCs）的诱导分化并鉴定诱导过程中miR-106b靶向调控神经元素3（neurogenin3，Ngn3）基因的表达。 方法 首先，分离培养BMMSCs，，应用活化素A（activin A）和β细胞素（betacellulin）将其诱导为ISCs，采用双硫腙（DTZ）染色和免疫荧光检测胰岛素的表达。然后，运用生物信息学方法对miR-106b和Ngn3基因的配对关系进行预测并通过双荧光素酶报告系统验证。Real-time PCR检测诱导过程中miR-106b和Ngn3基因的表达。 结果 BMMSCs经传代纯化后，形态均一，分布均匀，比较规则，呈长梭形。诱导后的ISCs变为椭圆形或者圆形，排列紧密，成团悬起，诱导效率大约为30%；DTZ染色显示亮红色或猩红色，表明细胞中有锌离子参与胰岛素合成；免疫荧光化学发现诱导2w后的ISCs有胰岛素的表达，呈绿色荧光。靶基因预测软件miRanda和TargetScan分别显示miR-106b和Ngn3基因配对关系良好。双荧光素酶报告系统鉴定发现miR-106b可以作用于Ngn33’UTR进而有效抑制其表达。Real-time PCR结果显示随着诱导时间的延长，Ngn3的表达量逐渐升高而miR-106b的表达量逐渐降低，二者呈负相关（r=-0.458，P＜0.01）。 结论miR-106b能够负性调控ISCs诱导过程中Ngn3基因的表达。
【关键词】：微小RNA 神经元素3 胰岛素产生细胞 小鼠
【学位授予单位】：辽宁医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 中文论著摘要4-6
• 英文论著摘要6-8
• 英文缩略语表8-9
• 前言9-11
• 实验材料与方法11-16
• 实验结果16-23
• 讨论23-26
• 结论26-27
• 本研究创新性的自我评价27-28
• 参考文献28-31
• 综述31-39
• 参考文献36-39
• 在学期间科研成绩39-40
• 致谢40-41
• 个人简介41-42

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 Eunmi Choi;Ki-Chul Hwang;;MicroRNAs as novel regulators of stem cell fate[J];World Journal of Stem Cells;2013年04期

  本文关键词：miR-106b靶向调控胰岛素产生细胞诱导过程中Ngn3基因的表达，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：363024