临床白念珠菌耐药性与ERG3基因突变及表达的关系

发布时间：2017-05-14 09:10

  本文关键词：临床白念珠菌耐药性与ERG3基因突变及表达的关系，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：近年来，随着侵袭性真菌感染危险因素的增多，其感染的发病率和死亡率不断上升，但感染的菌种仍以念珠菌属感染为主，其中白念珠菌是最常见的条件致病性真菌。由于抗真菌药物长期反复的广泛应用，导致耐药现象不断增加。因此，探讨白念珠菌耐药机制，指导临床合理用药，具有十分重要的意义。 目的：探讨白念珠菌对常见抗真菌药物的耐药性。对临床分离的白念珠菌ERG3基因行DNA提取、PCR扩增、测序及生物信息学分析。对ERG3基因表达的mRNA进行相对定量分析。明确白念珠菌ERG3基因突变及高表达与白念珠菌临床株耐药性的关系。 方法：收集临床患者分离的白念珠菌36株。运用KOH镜检、沙氏培养基、CHROMagar念珠菌显色培养基和API20CAUX鉴定系统进行鉴定。对36株白念珠菌行体外药物敏感性试验，获得耐药菌株和敏感菌株。提取白念珠菌ERG3基因组DNA，行PCR扩增，将扩增后的产物纯化测序，与genbank中已知的标准序列(AF069572)进行BLAST比对分析；采用实时定量PCR（RT-PCR）法，对白念珠菌ERG3基因表达的mRNA行相对定量分析。 结果： （1）36株经鉴定后的白念珠菌体外药物敏感性试验结果显示：白念珠菌对5-氟胞嘧啶和两性霉素B有较高的敏感性，对氟康唑、伊曲康唑、伏立康唑的耐药率分别为50.06%、72.22%和58.33%。 （2）19株白念珠菌的ERG3基因发生同义突变，它们发生的突变位点分别为T51C、T381C、T432C、C438T、T1044C，，均不引起编码氨基酸的改变。2株白念珠菌发生错义突变，1052位碱基由C突变为T，导致第351位氨基酸由丙氨酸转变为缬氨酸，发生错义突变的菌株产生多重耐药。 （3）对白念珠菌氟康唑的耐药菌株和敏感菌株ERG3mRNA的表达水平进行检测。18株氟康唑耐药菌中白念珠菌ERG3mRNA的高表达率达94.4%，16株氟康唑敏感菌中ERG3mRNA高表达率达50.0%。在高表达菌株中存在多重耐药和交叉耐药现象，并有1株菌发生错义突变，其余部分菌株发生同义突变。 结论： （1）白念珠菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B敏感性较高，对氟康唑、伊曲康唑和伏立康唑有不同程度的耐药，且对伊曲康唑、伏立康唑的耐药率高于氟康唑，存在多药耐药和交叉耐药现象。 （2）本研究表明ERG3基因突变及高表达均可能是引起白念珠菌产生耐药的重要因素之一，两者之间的相互作用有待进一步深入的探讨。同时可能有多种调节机制共同参与白念珠菌耐药的形成。
【关键词】：白念珠菌 耐药机制 ERG3基因
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R379.4
【目录】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 英文缩略词语表8-9
• 前言9-11
• 第一节 临床菌种分离、鉴定与耐药性分析11-18
• 1.1 实 验 材 料11-12
• 1.2 实 验 方 法12-13
• 1.3 结 果13-16
• 1.4 讨 论16-18
• 第二节 白念珠菌念珠菌临床分离菌株ERG3基因突变分析18-25
• 2.1 实 验 材 料18-19
• 2.2 实验 方 法19-21
• 2.3 结 果21-23
• 2.4 讨 论23-25
• 第三节 白念珠菌ERG3基因mRNA表达水平分析25-32
• 3.1 实 验 材 料25-26
• 3.2 实 验 方 法26-27
• 3.3 结 果27-30
• 3.4 讨 论30-32
• 结论32-33
• 参考文献33-37
• 综述37-43
• 参考文献40-43
• 个人简历43-44
• 致谢44

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 吴宪明;吴松锋;任大明;朱云平;贺福初;;密码子偏性的分析方法及相关研究进展[J];遗传;2007年04期

2 姜远英;刘伟;曹永兵;;念珠菌的耐药机制及应对策略研究[J];中国真菌学杂志;2011年04期

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本文编号：364746