TGF-β3对脂肪间充质干细胞向纤维软骨细胞诱导分化的影响

发布时间：2017-05-15 07:06

  本文关键词：TGF-β3对脂肪间充质干细胞向纤维软骨细胞诱导分化的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：颞下颌关节盘软骨缺损修复在口腔临床上仍然是较大的挑战。组织工程技术的发展已经为临床实现颞下颌关节软骨修复与重建带来了新的希望。然而成纤维软骨种子细胞的来源依然是亟待解决的问题。具有多向分化潜能的脂肪间充质干细胞(Adipose-derived stem cells,ADSCs)已显示了其作为种子细胞的优势,为成纤维软骨类组织修复带来了希望。本研究考察了转录生长因子TGF-β3对ADSCs生长形貌及向成纤维软骨细胞分化的影响。方法：采用10μg/ml TGF-β3诱导SD大鼠ADSCs,通过观察细胞的形态变化,组织学和免疫荧光染色等方法检测ADSCs产生的细胞外基质I型胶原、II型胶原(Collagen Ⅰ/Ⅱ)和蛋白多糖的情况,RT-PCR检测软骨特异蛋白的表达,初步评价ADSCs作为纤维软骨组织工程种子细胞的可行性。同时,在不同时间点(诱导2周、诱导3周),观察诱导时间对ADSCs分化的影响。结果：阿利新蓝染色结果表明,经TGF-β3诱导,ADSCs显示明显的深蓝色,表明ADSCs合成了大量的糖胺聚糖(Glycosaminoglycan,GAG)。免疫染色结果表明在TGF-β3诱导下,ADSCs合成Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原细胞外基质。大鼠脂肪间充质干细胞经TGF-β3诱导2周后向纤维软骨细胞分化,诱导组部分脂肪间充质干细胞呈星形或多角形,免疫组化染色显示有特异性蛋白Collagen Ⅰ/Ⅱ表达,RT-PCR检测也表明有CollagenI／II表达；而3周诱导组则表现向透明软骨分化的倾向,对照组表达不明显。结论：这些结果表明TGF-β3诱导了ADSCs向成纤维软骨样细胞分化,也意味着ADSCs具有作为工程化纤维软骨种子细胞的潜能。诱导时间的选择有促进大鼠脂肪间充质干细胞向不同软骨细胞分化的作用。
【关键词】：TGF-β3 脂肪间充质干细胞 纤维软骨 组织工程
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R329
【目录】：

• 中文摘要3-4
• Abstract4-5
• 缩略词表5-9
• 文献回顾9-16
• 1. 引言9
• 2. 脂肪干细胞的分离9
• 3. 脂肪干细胞的培养9-10
• 4. 脂肪干细胞的鉴定10
• 5. 脂肪干细胞的多向分化潜能10-12
• 5.1 向软骨细胞分化10-11
• 5.2 向脂肪细胞分化11
• 5.3 向成骨细胞分化11-12
• 5.4 向其他细胞分化12
• 6. 存在问题与展望12-14
• 参考文献14-16
• 第一部分 TGF-β3对脂肪间充质干细胞向纤维软骨细胞诱导分化的影响16-25
• 1. 材料与方法17-18
• 1.1 材料与仪器17
• 1.2 SD大鼠ADSCs的培养17
• 1.3 TGF-β3诱导ADSCs成纤维软骨细胞分化的细胞形貌观察17-18
• 1.4 阿利新蓝染色18
• 1.5 免疫组织化学染色18
• 2. 结果18-21
• 2.1 诱导分化前后的细胞形态变化18-19
• 2.2 阿利新蓝染色19-20
• 2.3 Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色20-21
• 3. 讨论21-23
• 参考文献23-25
• 第二部分 诱导时间对脂肪间充质干细胞向软骨细胞分化的影响25-38
• 1. 材料26-29
• 1.1 实验仪器和试剂26-27
• 1.1.1 实验仪器26
• 1.1.2 实验试剂配制26-27
• 1.2 细胞培养27-29
• 1.2.1 SD ADSCs细胞复苏27-28
• 1.2.2 SD ADSCs细胞冻存28
• 1.2.3 SD ADSCs细胞培养与传代28
• 1.2.4 SD ADSCs细胞计数28-29
• 2. 方法29-30
• 2.1 SD大鼠脂肪间质干细胞的培养及观察29
• 2.2 阿利新蓝染色29
• 2.3 免疫组织化学染色29-30
• 2.4 实时定量PCR(real-time quantitative PCR)/QPCR30
• 3. 结果30-34
• 3.1 ADSCs形态学观察30-31
• 3.2 诱导组分化后的形态变化31
• 3.3 阿利新蓝染色31-32
• 3.4 Ⅰ型胶原和Ⅱ型胶原免疫组织化学染色32-33
• 3.4.1 Ⅰ型胶原免疫组织化学染色32
• 3.4.2 Ⅱ型胶原免疫组织化学染色32-33
• 3.5 实时定量PCR(real-time quantitative PCR)/QPCR检测33-34
• 4. 讨论34-36
• 参考文献36-38
• 综述38-46
• 摘要38
• Abstract38-39
• 1. 种植体支抗形态对稳定性影响的组织学研究39
• 2. 种植体支抗表面处理对稳定性影响的组织学研究39-40
• 3. 种植体支抗植入方式对稳定性影响的组织学研究40
• 4. 种植体支抗种植后的愈合对种植钉支抗稳定性的组织学研究40-41
• 5. 力学加载因素对种植体支抗稳定性影响的组织学研究41-43
• 5.1 正畸力加载对愈合的影响41
• 5.2 加力时机对种植体支抗稳定性的组织学研究41-42
• 5.3 加力大小对种植钉支抗稳定性的组织学研究42-43
• 参考文献43-46
• 攻读硕士学位期间研究成果46-47
• 致谢47

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 吴晶,白玉兴,王邦康,高晓辉;微型支抗种植钉愈合期骨结合状态的组织学观察[J];北京口腔医学;2005年04期

2 郭彪;翟颖超;邹敬才;;正畸种植体支抗稳定性的研究进展[J];北京口腔医学;2010年05期

3 严拥庆;高益鸣;钱玉芬;;支抗种植体的组织学研究进展[J];上海口腔医学;2006年06期

  本文关键词：TGF-β3对脂肪间充质干细胞向纤维软骨细胞诱导分化的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：367071