旋毛虫与肝癌H7402相关抗原蛋白的单克隆抗体制备及应用

发布时间：2017-05-15 11:31

  本文关键词：旋毛虫与肝癌H7402相关抗原蛋白的单克隆抗体制备及应用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：旋毛虫（Trichinella speralis）是一种毛形科毛形属寄生虫，对人畜皆有感染能力。根据现有的研究资料表明，旋毛虫对部分肿瘤细胞具有一定的抑制和干扰作用，能够降低肿瘤细胞的增殖能力或诱导肿瘤细胞的凋亡。肝癌被认定为世界健康一大杀手，发病率及死亡率居高不下，其危险性不容小觑。但是，肝癌疫苗及传统抗肝癌药物并不能良好的发挥作用，，因此，探寻高效、低毒、副作用少的生物制剂成为人们对抗肝癌的迫切需求。现已有研究证明旋毛虫虫体蛋白与肝癌H7402细胞间存在交叉抗原；本实验室利用免疫筛选得到的旋毛虫与肝癌H7402相关的CK-1基因制备了单克隆抗体，其在体内和体外实验中均发现能够抑制肝癌H7402细胞的生长。由此可见，旋毛虫体内可能含有或分泌抗癌物质。故而，本实验拟通过表达文库筛选法寻找其他旋毛虫与肝癌H7402细胞之间的相关抗原，并利用制备的单克隆抗体来观测其抑制肿瘤细胞生长的效果，从而为日后探索肝癌的生物治疗方法和旋毛虫抑制肿瘤的效果提供信息。 本实验在已建立的旋毛虫cDNA表达文库的基础上，利用免疫筛选的方法获得了与肝癌H7402细胞具有免疫反应的6种相关抗原基因，分别为半胱氨酸线性蛋白（Tsp_06120）、高尔基体联合植物相关致病蛋白（Tsp_07885）、硒蛋白T（Tsp_03801）、DNA剪切修复蛋白ERCC-1（Tsp_01641）、脱氧核苷酸转移酶作用蛋白（Tsp_01476）和核糖氧化还原蛋白（Tsp_04425）。通过生物学分析后，后续试验选择硒蛋白T基因进行原核表达和纯化。在硒蛋白T单克隆抗体的制备中，我们共得到3株单克隆细胞记为4F1，4H2和4D4。经抗体亚类鉴定、核型分析和效价检测后，4H2为IgG2b亚类，染色体数目104，腹水效价，大于1×105。随后，用4H2抗体进行了体内和体外的肿瘤抑制实验。结果发现，在体外MTT实验中，当单克隆抗体含量为50μg/100μL时，对肝癌H7402细胞的生长抑制率为26.7%；在动物模型实验中，当单克隆抗体含量为100μg/100μL时，对肿瘤的抑制率为80.3%。
【关键词】：旋毛虫 硒蛋白T 单克隆抗体 体内外抑制试验
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R735.7;R392
【目录】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 英文缩写词注释表8-9
• 引言9-10
• 第一篇 文献综述10-16
• 第1章 旋毛虫抗肿瘤的相关研究进展10-13
• 第2章 肝癌治疗方法的研究进展13-16
• 第二篇 实验内容16-43
• 第1章 旋毛虫与肝癌 H7402 细胞相关抗原基因的筛选和鉴定16-23
• 1.1 材料与方法16-19
• 1.2 结果19-21
• 1.3 讨论21-22
• 1.4 小结22-23
• 第2章 旋毛虫硒蛋白 T 基因的表达与纯化23-32
• 2.1 材料与方法23-28
• 2.2 结果28-31
• 2.3 讨论31
• 2.4 小结31-32
• 第3章 旋毛虫硒蛋白 T 单克隆抗体的制备与纯化32-38
• 3.1 材料与方法32-35
• 3.2 结果35-37
• 3.3 讨论37
• 3.4 小结37-38
• 第4章 单克隆抗体抗肝癌 H7402 效果的检测38-43
• 4.1 材料与方法38-39
• 4.2 结果39-40
• 4.3 讨论40-41
• 4.4 小结41-43
• 结论43-44
• 参考文献44-50
• 导师简介50-51
• 作者简介及科研成果51-52
• 致谢52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 姚云英;陈晓宁;;宿主感染旋毛虫囊包幼虫后免疫功能的系列变化[J];承德医学院学报;2010年01期

2 何艳,林德馨,叶庆林;全反式维甲酸对人肝细胞癌细胞生长的影响[J];福建医科大学学报;1998年04期

3 李秀兰;姜曰水;;聚乙二醇诱导细胞融合影响因素探究[J];菏泽学院学报;2007年05期

4 于在江;马学恩;周建华;;切胶纯化表达蛋白包涵体的可行性分析[J];生物技术;2007年03期

5 王娟娟,贾彦军;微生物原生质体融合方法的综述[J];畜牧兽医科技信息;2005年10期

6 刘利珍;简捷;吴建兵;黄龙璋;史芳;;Nimesulide联合奥沙利铂对人肝癌细胞增殖与凋亡的影响[J];世界华人消化杂志;2008年36期

7 瞿文全,金治平,赵德修,陈亚琼,李名扬;快速简便筛选cDNA文库的SSS法[J];遗传;2003年05期

8 李文桂,陈雅棠,蒋霞,刘成伟,余登高;旋毛虫病患者血清细胞因子和一氧化氮水平检测[J];中国地方病学杂志;2002年03期

9 程红岩,徐爱民,陈栋,贾雨辰;肝癌介入治疗的相关因素与死亡时间关系探讨[J];中华肿瘤杂志;2001年06期

10 吴涛;张西臣;李建华;张国才;杨举;宫鹏涛;;不同旋毛虫粗抗原对BALB/c小鼠体内SP2/0肿瘤抑制作用观察[J];中国病原生物学杂志;2007年04期

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1 段玲欣;旋毛虫与Sp2/0骨髓瘤细胞相关抗原基因抗肿瘤效应研究[D];吉林大学;2009年

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本文编号：367673