轮状病毒VP7抗原表位嵌合蛋白免疫学研究

发布时间：2017-05-15 12:18

  本文关键词：轮状病毒VP7抗原表位嵌合蛋白免疫学研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：轮状病毒(Rotavirus, RV)是引起人类、哺乳动物类、禽类病毒性腹泻的主要病原体。几乎全世界每一个儿童都被RV感染过,每年有大量儿童因为感染RV致死。由于RV所导致的高发病率及对儿童健康的严重危害,RV疫苗的使用和发展也引起多方关注。由于RV型别众多,研发具有广泛免疫保护作用的疫苗带来较大困难。 现阶段的RV基因重配减毒活疫苗在安全性方面存在着很多不足,例如接种者使用后出现肠套叠症状,疫苗被猪环状病毒污染等情况的发生。其次,在免疫保护性方面也还存在许多不足。随着生物技术的发展和对基因工程疫苗研究的不断深入,利用基因工程技术开发新疫苗是当前解决这个问题的较好途径之一。 作为RV的组抗原蛋白,VP6蛋白高度保守,能够产生交叉保护性,而且在RV中含量最为丰富,占病毒结构蛋白总量的39%。VP4和VP7则可以诱发机体产生特异性的中和抗体。本研究用基因重组技术,将3个VP7高保守性的抗原表位G[1]142,G[4]208,G[2]87插入VP6载体蛋白的表面,在大肠杆菌细胞中表达,研究重组嵌合蛋白免疫学特性。结果显示,所表达重组嵌合蛋白可与抗重组VP6载体蛋白免疫豚鼠血清抗体和抗RV Wa和抗SA11反应：重组嵌合蛋白免疫豚鼠血清抗体可与VP6载体蛋白反应,可与Wa和SA11病毒VP6和VP7反应,具有中和Wa和SAl1病毒在MA104细胞上的感染性作用。重组嵌合蛋白上的VP7抗原表位,可提高VP6载体蛋白的抗原反应性和免疫原性。本研究结果对发展新型RV重组疫苗具有潜在的应用。
【关键词】：RV VP6载体蛋白 VP7抗原表位 嵌合疫苗
【学位授予单位】：北京协和医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R373
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-14
• 实验材料及方法14-36
• 一、实验材料14-17
• 1. 主要仪器14-15
• 2. 主要试剂15
• 3. 实验动物，菌毒株，载体质粒和哺乳动物培养细胞15-17
• 二、实验方法17-36
• 1. pETP6重组质粒构建及鉴定17-20
• 2. pETP6v载体质粒的构建及鉴定20-28
• 3. 含有VP6蛋白基因pETP6F载体质粒的构建28
• 4. 携带RV VP7抗原表位重组表达质粒构建及鉴定28-31
• 5. 重组VP6载体蛋白和重组嵌合蛋白VP6/EP的表达及检测31
• 6. 重组载体蛋白(rVP6F)和重组嵌合蛋白的纯化31
• 7. Bradford法测定纯化蛋白的浓度31-32
• 8. MA104细胞复苏与传代培养32-33
• 9. RV增殖33
• 10. RV的纯化与浓缩33
• 11. 微量滴定法测定SAll与Wa病毒感染性滴度33-34
• 12. 动物免疫及血清抗体的制备34
• 13. 重组VP6载体蛋白和重组嵌合蛋白免疫血清中和抗体效价的检测34-35
• 14. Western blot检测纯化的重组嵌合蛋白的免疫原性35-36
• 结果与分析36-47
• 1. 质粒的构建36-39
• 2. 重组嵌合蛋白的表达及PAGE检测39-40
• 3. 重组嵌合蛋白的纯化及PAGE检测40-41
• 4. 纯化蛋白浓度的测定41-42
• 5. RV感染性滴度的检测42
• 6. 免疫动物血清中和抗体检测42-43
• 7 Western blot检测重组嵌合蛋白的免疫原性43-47
• 讨论47-49
• 小结49-50
• 参考文献50-54
• 附录54-71
• (一) 缩略词54-56
• (二) 主要溶液配方56-63
• (三) 主要实验方法63-69
• (四) TB-Chen株VP6编码基因核苷酸序列及氨基酸序列69-70
• (五) TB-Chen株VP6F载体编码基因核苷酸序列70-71
• 致谢71-72
• 研究生简历72-73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 陈元鼎;刘晓;熊新宇;曹志亮;文喻玲;赵庆欢;余洋;尹兴晓;李传印;范耀春;;A组人轮状病毒全基因组克隆和基因型分析[J];中国生物工程杂志;2008年02期

2 江保明;杨晓明;徐德启;;轮状病毒疫苗的现状和发展动向[J];中国生物制品学杂志;2012年02期

3 潘小霞;张顺;陈元鼎;;轮状病毒VP_6蛋白免疫学研究进展[J];中国疫苗和免疫;2011年02期

4 段招军;;人A组轮状病毒疫苗研究进展[J];中国新药杂志;2012年10期

  本文关键词：轮状病毒VP7抗原表位嵌合蛋白免疫学研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：367764