表没食子儿茶素-3-没食子酸酯对脂多糖刺激小鼠巨噬细胞表达细胞因子和趋化因子的影响

发布时间：2017-05-17 02:12

  本文关键词：表没食子儿茶素-3-没食子酸酯对脂多糖刺激小鼠巨噬细胞表达细胞因子和趋化因子的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：炎症是临床常见的一种病理生理过程，与多种疾病的发生和恶化有关。在炎症反应期间，由组织内的细胞表达分泌的细胞因子、趋化因子等进一步地募集嗜中性粒细胞、单核细胞等免疫反应细胞进入创伤部位参与炎症反应，它们对炎症反应的发生、发展起到了重要的调节作用。 表没食子儿茶素-3-没食子酸酯(epigallocatechin-3-gallate, EGCG)是绿茶多酚重要的有效活性成分，具有抗炎症、抗氧化、抗辐射、抗衰老、诱导肿瘤细胞周期停滞和启动肿瘤细胞凋亡等多种生物学作用。本实验室先前的研究表明，EGCG能够抑制皮肤伤口愈合期间白细胞介素-1(interleukin-1，IL-1)、肿瘤坏死因子-(tumor necrosis factor-TNF-)、单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1, MCP-1)、基质金属蛋白酶-1(metalloproteinase-1, MMP-1)和巨噬细胞炎症蛋白-2(macrophage inflammatoryprotein-2, MIP-2)的基因表达，降低组织IL-1、TNF-、MCP-1、MIP-2和MMP-1的水平，促进基质金属蛋白酶抑制因子-1(tissue inhibitor of metalloproteinase-1, TIMP-1)基因的表达。 本论文以小鼠巨噬细胞RAW264.7为实验材料，利用MTT法检测EGCG对RAW264.7细胞增殖的影响，实时荧光定量PCR和ELISA法研究EGCG对脂多糖(Lipopolysaccharides，LPS)刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7促炎症细胞因子TNF-、IL-1和趋化因子MCP-1、MIP-2基因表达及其生成的影响。实验结果显示，1μg/mL LPS处理24h对小鼠巨噬细胞RAW264.7增殖没有影响，0~100μmol/L EGCG处理24h对RAW264.7细胞的增殖也没有影响。1μg/mL LPS可刺激RAW264.7细胞TNF-、IL-1、MCP-1、MIP-2的基因表达与分泌，而EGCG对LPS刺激的RAW264.7细胞TNF-、IL-1、MCP-1、MIP-2基因水平和蛋白水平均有抑制效应，并呈剂量依赖性，50μmol/L EGCG的抑制作用最强，，提示EGCG能显著抑制LPS刺激巨噬细胞诱导的炎症反应。
【关键词】：炎症反应 表没食子儿茶素-3-没食子酸酯 肿瘤坏死因子- 白细胞介素-1 单核细胞趋化蛋白-1 巨噬细胞炎性蛋白-2 巨噬细胞
【学位授予单位】：河南师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-6
• 缩略词表6-10
• 文献综述10-22
• 1 炎症反应10-15
• 1.1 炎症反应的发生过程10-11
• 1.2 与炎症反应有关的细胞因子、趋化因子11-14
• 1.3 脂多糖诱导炎症反应的机理和过程14-15
• 2 巨噬细胞在炎症反应过程中的作用15-16
• 3 表没食子儿茶素-3-没食子酸酯16-22
• 3.1 表没食子儿茶素-3-没食子酸酯简介16-17
• 3.2 表没食子儿茶素-3-没食子酸酯抗炎机理的研究17-22
• 第一章 引言22-24
• 第二章 材料和方法24-38
• 2.1 实验材料24-28
• 2.1.1 实验细胞24
• 2.1.2 主要试剂24-25
• 2.1.3 主要仪器设备25-26
• 2.1.4 试剂的配制26-28
• 2.2 RAW264.7 细胞的培养28
• 2.2.1 RAW264.7 细胞的培养与传代28
• 2.2.2 RAW264.7 细胞的冻存与复苏28
• 2.3 MTT 法检测细胞增殖28-29
• 2.3.1 实验设计28-29
• 2.3.2 EGCG 和 LPS 对 RAW264.7 细胞增值影响的测定29
• 2.4 实时荧光定量 PCR29-34
• 2.4.1 实验设计29
• 2.4.2 实验用品的 RNase-free 处理29-30
• 2.4.3 RNA 提取30-31
• 2.4.4 RNA 完整性检测31
• 2.4.5 RNA 浓度和纯度检测31-32
• 2.4.6 RNA 的保存32
• 2.4.7 逆转录反应32
• 2.4.8 试剂的分装32-33
• 2.4.9 实验所用引物33
• 2.4.10 PCR 操作步骤33-34
• 2.5 ELISA 法检测34-38
• 2.5.1 实验设计34-35
• 2.5.2 ELISA 检测前准备工作35
• 2.5.3 ELISA 检测操作步骤35-36
• 2.5.4 结果计算36-38
• 第三章 结果38-50
• 3.1 MTT 法实验结果38-40
• 3.1.1 LPS 对 RAW264.7 细胞增殖的影响38-39
• 3.1.2 EGCG 对 RAW264.7 细胞增殖的影响39-40
• 3.2 RNA 质量检测40-41
• 3.3 EGCG 对 LPS 刺激 RAW264.7 细胞 TNF- 基因表达的影响41-42
• 3.4 EGCG 对 LPS 刺激 RAW264.7 细胞 TNF- 生成的影响42-43
• 3.5 EGCG 对 LPS 刺激 RAW264.7 细胞 IL-1 基因表达的影响43-44
• 3.6 EGCG 对 LPS 刺激 RAW264.7 细胞 IL-1 生成的影响44-45
• 3.7 EGCG 对 LPS 刺激 RAW264.7 细胞 MCP-1 基因表达的影响45-46
• 3.8 EGCG 对 LPS 刺激 RAW264.7 细胞 MCP-1 生成的影响46-47
• 3.9 EGCG 对 LPS 刺激 RAW264.7 细胞 MIP-2 基因表达的影响47-48
• 3.10 EGCG 对 LPS 刺激 RAW264.7 细胞 MIP-2 生成的影响48-50
• 第四章 讨论50-54
• 4.1 发生炎症反应过程中 TNF- 、IL-1 、MCP-1 和 MIP-2 基因的表达分析50-51
• 4.2 EGCG 对 TNF- 、IL-1 、MCP-1、MIP-2 分泌和基因表达的影响51-54
• 第五章 结论54-56
• 参考文献56-62
• 致谢62-64
• 攻读学位期间发表的学术论文目录64-65

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：372362