蚕蛹粗提浸液致敏小鼠过敏模型建立

发布时间：2017-05-17 04:11

  本文关键词：蚕蛹粗提浸液致敏小鼠过敏模型建立，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 家蚕过敏是一种具有中国特色的职业性过敏与食物过敏，家蚕蛋白有较强的过敏原活性也是主要的过敏原。建立蚕蛹粗提浸液致敏BALB/C小鼠肠道和哮喘模型；检测特异性IgE和IgG水平，脾细胞因子变化，肠道和肺部HE染色病理分析。本研究具有鲜明的中国特色，为家蚕过敏的诊断与治疗奠定基础。 方法： 1.蚕蛹粗提浸液致敏BALB/C小鼠肠道过敏模型方法： 将32只5-6周近亲雌性BALB/c小鼠随机分为阴性组（PBS组），阳性对照霍乱毒素组(CT组)，蚕蛹粗提浸液组(SPE组)，霍乱毒素+蚕蛹粗提浸液组(CT+SPE组)每组8只。阴性组灌胃PBS；阳性组灌胃蚕蛹粗提浸液，间隔3天、共灌胃6次。灌胃激发3次，灌胃激发前后测肛温、观察致敏状态；激发后给肠道致敏模型评分；收集小鼠血清，并收集小鼠脾脏细胞上清，测: sIgE、sIgG2a、细胞因子（IFN-γ、IL-5、IL-4）。小鼠空肠段组织病理变化等指标对模型的构建进行评价。 2.蚕蛹粗提浸液致敏小鼠哮喘模型方法： 将16只5-6周近亲雌性BALB/c小鼠随机分为阴性组（PBS组），，阳性组（SPE组）每组8只。阴性组腹腔皮下注射PBS；阳性组腹腔注射蚕蛹粗提浸液致敏，连续3次，每次间隔1周。然后滴鼻激发一周每天一次。激发后进行气道高反应检测；收集BALF（肺泡灌洗液）进行细胞计数、分类。24小时内收集小鼠血清；检测特异性抗体（IgE）、细胞因子（IL-4、IL-10、INF-γ）以及肺组织病理变化等指标对模型的构建进行评价。 结果： 1.蚕蛹粗提浸液致敏BALB/C小鼠肠道过敏模型结果： BALB/c小鼠CT+SPE组肛温变化、过敏状态最明显；家蚕粗提浸液肠道组织病理改变，明显有炎症病变；脾细胞培养上清液IL-4、IL-5升高，INF-γ降低；嗜酸性粒细胞升高（P＜0.05），阴性组各项指标均无升高。 2.蚕蛹粗提浸液致敏BALB/C小鼠哮喘模型结果： 家蚕粗提浸液组肺部病理改变，明显有炎症病变，BALF（肺泡灌洗液）细胞计数升高，灌洗液IL-4、IL-10升高，INF-γ降低；嗜酸性粒细胞升高（P＜0.05），阴性组各项指标均无升高。 结论： 蚕蛹粗提浸液灌胃的方法致敏BALB/C小鼠肠道过敏建模成功；蚕蛹粗提浸液致敏BALB/C小鼠过敏性哮喘建模成功。两个过敏模型的建立为以后蚕蛹过敏诊断治疗打下基础。
【关键词】：蚕蛹 过敏原 肠道过敏 过敏性哮喘 腹腔注射 灌胃
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R-332;R392
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文缩略词表10-11
• 第1章 引言11-14
• 1.1 变态反应11
• 1.2 过敏原11
• 1.3 过敏性疾病的流行病学11-12
• 1.4 食物过敏12
• 1.5 家蚕过敏研究发展12-13
• 1.6 研究内容13-14
• 第2章 蚕蛹粗提浸液致敏BALB / C小鼠肠道过敏模型14-32
• 2.1 实验材料和试剂14-17
• 2.1.1 试剂及盒抗体14-15
• 2.1.2 主要仪器15-16
• 2.1.3 溶液配制16-17
• 2.1.4 实验动物及蚕蛹17
• 2.2 方法17-22
• 2.2.1 蚕蛹粗提浸液提取，BCA及定量17-19
• 2.2.2 蚕蛹粗提浸液致敏小鼠分组、剂量、测量肛温19
• 2.2.3 灌胃致敏小鼠19
• 2.2.4 测量小鼠肛温19
• 2.2.5 灌胃激发19-20
• 2.2.6 灌胃致敏小鼠症状评分20
• 2.2.7 小鼠眼球取血，取脾脏，取空肠20
• 2.2.8 小鼠空肠组织病理切片观察20-21
• 2.2.9 ELISA测定血清中特异性IgE、SIgG2a及细胞因子水平21-22
• 2.3 结果22-30
• 2.3.1 蚕蛹蛋白BCA定量，蛋白电泳SDS-PAGE图22-24
• 2.3.2 激发后小鼠肛温对比24
• 2.3.3 激发后小鼠过敏症状评分24-25
• 2.3.4 激发后各组小鼠过敏症状的照片25-26
• 2.3.5 脾脏细胞上清液细胞因子检测26-28
• 2.3.6 血清中特异性SIgE水平28
• 2.3.7 血清中特异性IgG2a水平28-29
• 2.3.8 小鼠空肠段组织病理学分析29-30
• 2.4 讨论30-32
• 第3章 蚕蛹粗提浸液致敏 BALB / C 小鼠哮喘模型的建立32-43
• 3.1 实验材料和试剂32-35
• 3.1.1 试剂及盒抗体32-33
• 3.1.2 主要实验仪器33-34
• 3.1.3 主要试剂配制34-35
• 3.1.4 家蚕蛋白、实验动物35
• 3.2 实验方法35-38
• 3.2.1 家蚕粗提液制备35
• 3.2.2 气道高反应性（AHR）的变化检测35-36
• 3.2.3 支气管肺泡灌洗及细胞计数36
• 3.2.4 血清特异性抗体IgE检测36
• 3.2.5 脾细胞因子检测36
• 3.2.6 肺组织取材、HE染色36-37
• 3.2.7 ELISA测定血清中特异性 IgE、细胞因子水平37-38
• 3.3 结果38-42
• 3.3.1 蚕蛹粗蛋白定量38
• 3.3.2 气道高反应测试结果分析38-39
• 3.3.3 肺泡灌洗液细胞分析39-40
• 3.3.4 脾细胞培养液和肺泡灌洗细胞因子 IL-4、IL-10 和 IFN-γ检测40
• 3.3.5 小鼠血清特异性 IgE 水平40-41
• 3.3.6 肺组织病理学变化41-42
• 3.4 讨论42-43
• 第4章 结论与展望43-44
• 4.1 结论43
• 4.2 展望43-44
• 致谢44-45
• 参考文献45-48
• 攻读学位期间的研究成果48-49
• 综述49-52
• 参考文献52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

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本文编号：372516