重组人骨靶向干扰素γ-1b在大肠杆菌中的表达

发布时间：2023-02-25 23:49

　　目的建立人骨靶向干扰素γ-1b的高效原核表达体系。方法从Drug Bank数据库下载人干扰素γ-1b氨基酸序列,在羧基端加上10个天冬氨酸标签作为骨靶向分子。采用大肠杆菌偏爱密码子,DNA Star软件分析获得骨靶向性干扰素γ-1b的基因序列。人工合成基因序列并克隆入pET3c质粒表达载体。将上述pET3c-rhIFNγ-1b-D10重组表达载体转入大肠杆菌BL21,筛选高效表达菌株。分离包涵体,8mol/L尿素溶解,利用镍柱亲和层析纯化重组蛋白。Western blot检测目的蛋白的特异性表达。结果测序结果显示所克隆的骨靶向rhIFNγ-1b基因序列正确,筛选出高效表达菌株。经SDS-PAGE显示在相对分子质量19KD处出现特异的目的蛋白表达带,表达量约占全菌蛋白的30%。表达产物以包涵体形式存在,8mol/L尿素变性后经镍柱亲和层析纯化,纯度大于90%,浓度为0.8mg/mL。Western检测显示在19KD处出现特异性目的条带。结论成功在大肠杆菌中表达了人骨靶向干扰素γ-1b,为研究其生物学活性及用于骨硬化症的治疗奠定基础。

【文章页数】：3 页

【文章目录】：
1--材料与方法
    1.1 大肠杆菌DH5α、BL21、质粒pET3c由本室保存。
    1.2 rhIFNγ-1b-D10重组表达载体的构建
    1.3 骨靶向重组人干扰素γ-1b (rhIFNγ-1b-D10) 在大肠杆菌中的表达
    1.4 目的蛋白的Western blot检测
    1.5 目的蛋白表达形式分析
    1.6 目的蛋白的镍柱亲和层析纯化
2--结---果
    2.1 骨靶向重组人干扰素γ-1b (rhIFNγ-1b-D10) 的表达与鉴定
    2.2 rhIFNγ-1b-D10蛋白表达形式的确定
    2.3 包涵体分离及纯化
3--讨---论



本文编号：3749418