酒精诱导PC12细胞自噬及其与P62作用的关系

发布时间：2017-05-18 06:12

  本文关键词：酒精诱导PC12细胞自噬及其与P62作用的关系，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 采用不同浓度酒精作用于大鼠嗜铬细胞瘤细胞(PC12细胞)，观察细胞自噬发生及其与P62变化的关系。 方法 用四甲偶氮唑盐比色法(MTT)观察酒精对PC12细胞生存率的影响；间接免疫荧光法检测细胞自噬标志性蛋白LC3和P62的变化；高内涵活细胞成像系统检测细胞LC3荧光强度；透射电镜检测细胞自噬的超微结构；Western blotting方法检测P62蛋白量的表达。 结果 100mmol/L、200mmol/L、400mmol/L和800mmol/L浓度酒精处理PC12细胞24h，与0mmol/L酒精组比较，PC12细胞生存率分别为91.97%(P＜0.05)、72.63%(P＜0.01)、58.23%(P＜0.01)、50.82%(P＜0.01)，酒精对PC12细胞的增殖有显著的抑制作用，呈浓度依赖性。间接免疫荧光检测到酒精致PC12细胞自噬标志性蛋白LC3在细胞核周围密度增高，并与P62形成点状聚集共定位；高内涵活细胞成像系统检测到酒精浓度为200mmol/L作用2h时，PC12细胞LC3自噬荧光强度最高；透射电镜也观察到酒精作用的PC12细胞质中自噬体和自噬溶酶体。Western blotting结果显示，不同浓度酒精处理PC12细胞2h，P62蛋白表达量显著增加(P＜0.01)；用200mmol/L浓度酒精处理PC12细胞，，P62蛋白表达在2h达到最高值。 结论 酒精诱导PC12细胞的发生自噬现象，P62蛋白参与此自噬调控过程。
【关键词】：酒精 自噬 P62 LC3 PC12细胞
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 摘要4-5
• ABSTRACT5-7
• 目录7-9
• 引言9-13
• 1 实验材料、试剂和仪器13-17
• 1.1 细胞株13
• 1.2 仪器和产地13-14
• 1.3 主要试剂14
• 1.4 主要试剂配置方法14-17
• 2 实验方法17-21
• 2.1 MTT 比色法检测细胞生存率17
• 2.2 间接免疫荧光检测 LC3 在 PC12 细胞的表达及定位17
• 2.3 高内涵活细胞成像系统检测 LC3 荧光强度17-18
• 2.4 透射电镜观察自噬体和自噬溶酶体形态学特征18
• 2.5 Western blotting 检测 P62 蛋白表达量18-20
• 2.5.1 蛋白样品的制备和定量18-19
• 2.5.2 SDS-PAGE 及转移电泳19-20
• 2.5.3 抗体杂交和发光检测20
• 2.6 统计学方法20-21
• 3 结果21-27
• 3.1 酒精对 PC12 细胞生存率的影响21-22
• 3.2 酒精对 PC12 细胞 LC3 的影响22
• 3.3 酒精对 PC12 细胞 LC3 荧光强度的影响22-23
• 3.4 自噬体和自噬溶酶体的超微结构23-24
• 3.5 PC12 细胞中 P62 与 LC3 的共定位24
• 3.6 酒精对 PC12 细胞 P62 蛋白表达的影响24-27
• 4 讨论27-29
• 5 结论29-31
• 参考文献31-35
• 文献综述35-47
• 参考文献43-47
• 附录 英文缩略词表47-48
• 致谢48-49

【共引文献】

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本文编号：375270