LIF对血管内皮祖细胞体外增殖和分化影响的研究

发布时间：2017-05-18 06:11

  本文关键词：LIF对血管内皮祖细胞体外增殖和分化影响的研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：利用体外细胞学对照实验观察LIF对体外血管内皮祖细胞（EPCs）的增殖和分化的影响；探索血管内皮祖细胞`在体外大规模扩增的新方法。 方法：在签署知情同意书前提下，在无菌条件下在泸州医学院附属医院妇产科正常剖宫产胎儿断脐带后经脐带侧取脐血约80ml。采用密度梯度分离法分离获取脐血单个核细胞,将细胞密度调整为3×106/ml。体外液体培养体系分为两类：一类为EGM-2完全培养基,设立为对照组，另一类为添加了LIF（10ng/ml）的EGM-2完全培养基,设立为实验组。将分离脐血所获的单个核细胞置于两个培养板中分别加上述不同培养基，在37℃，5％C02培养箱中培养。于培养第1、3、7、14日在倒置显微镜下观察比较两组细胞形态和生长情况，并行CD133表达的流式细胞检测。于培养的第72、96、120、144、168h对两组行MTT检测,计算实验组增殖率并绘制生长曲线。实验所得计量资料以“均数士标准差”表示；组间比较采用t检验，以a=0.05为检验水准，当P0.05时统计学上有显著意义；所有统计资料均由SPSS17.0统计完成。 结果：①脐血所获的单个核细胞刚分离出来时细胞的形态呈大小相近的类圆形，其体积较小、折光度好，均匀分布.流式细胞检测CD133的阳性表达率较低，仅占单个核细胞的0.9%。接种在纤维连接蛋白(FN)包被的培养板后3天内对照组和实验组细胞开始贴壁生长，培养第3天可见部分细胞出现聚集形成细胞簇向集落雏形形成生长，实验组细胞集落形成趋势较对照组明显；细胞体积逐渐增大，大小不等，逐渐由圆形变为短梭形。原代培养的第7天细胞，镜下可见两组均有较快的细胞增殖，细胞体积较前明显增大，细胞相互聚集，密度增大，数量增多；有较多的克隆集落形成，集落中央以圆形细胞群为主，围绕圆形细胞周围的是呈纺锤形放射状排列的梭形细胞；实验组细胞集落及细胞数量较对照组明显占优势，而细胞体积与对照组相比则偏小。培养第14天，对照组细胞可达80%左右融合，中央细胞以多角形细胞为主，也有梭形细胞，呈铺路石样生长，细胞体积明显偏大；实验组90%左右融合，中间以椭圆形细胞和梭形细胞为主，外周多角形细胞不明显。②培养第1、3、7、14天CD133的流式细胞检测结果显示:对照组CD133的表达表现为先升后降，培养7天表达最强，其下降幅度则较前上升幅度更为明显；实验组CD133的表达虽亦表现为先升后降，，但上升幅度较对照组快，下降幅度与对照组相比则明显要慢。③MTT检测结果显示:两组A490吸光度的差值随培养时间的延长而逐渐增大，对照组EPCs所测得的A490(nm）的吸光度值较同时期实验组小，差异具有统计学意义（P0.05)。实验组细胞增殖率较对照组高。 结论： 在体外特定培养体系下，添加一定浓度的白血病抑制因子（10ng/ml)能促进脐血来源内皮祖细胞的增殖并抑制其分化。
【关键词】：内皮祖细胞 白细胞抑制因子 增殖 分化
【学位授予单位】：泸州医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-12
• 材料与方法12-17
• 结果17-25
• 讨论25-30
• 结论30-31
• 参考文献31-34
• 英汉缩略词对照表34-35
• 血管内皮祖细胞及与肿瘤的相关性（综述）35-40
• 参考文献38-40
• 致谢40-41
• 读书期间发表文章41-42

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前5条

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  本文关键词：LIF对血管内皮祖细胞体外增殖和分化影响的研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：375261