脐带血造血干/祖细胞体外扩增制剂及其临床前安全性检测分析

发布时间：2023-04-13 20:10

　　造血干细胞移植(HSCT)可用来治疗多种恶性造血系统疾病.HSCT成功植入的先决条件之一是必须输入足够量的造血干/祖细胞(HS/PCs).细胞剂量过少会导致植入时间延长,移植失败的可能性增大.从脐带血中直接分离的造血干细胞因数量较少而不能满足临床移植的需要.利用骨髓间充质干细胞作为滋养层联合细胞因子组合(SCF+G-CSF+TPO)使脐血造血干/祖细胞体外扩增75.2±15.0倍,CD34+细胞扩增33.4±12.3倍.将扩增的细胞收集,重新悬浮于L-15培养液中制成造血干/祖细胞制剂,并在建立相应的检测技术基础上,进行了细胞制剂的无菌检测以及细胞制剂中细菌内毒素、牛血清残留量和干细胞因子残留量的检测.通过上述检测分析,为扩增的造血干/祖细胞制剂服务临床需要,辅助治疗恶性血液病和再生障碍性贫血以及遗传性贫血重建造血功能提供实验依据.

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【文章目录】：
1 材料和方法
2 临床前安全性检测
    2.1 细菌真菌检查
    2.2 支原体检查
    2.3 外源病毒检测
        2.3.1 体外培养法检测外源病毒
        2.3.2 体内接种法检测外源病毒
        2.3.3 鸡胚接种法检测外源病毒
    2.4 内毒素检测
        2.4.1 内毒素限值 (L) 、样品最大稀释倍数 (MVD) 的确定
        2.4.2 鲎试剂灵敏度复核
        2.4.3 细胞制品的干扰试验
        2.4.4 细胞制品内毒素的检测按照文献[14]进行并判定结果.
    2.5 SCF (干细胞因子) 残留量检测
    2.6 牛血清残留量检测
    2.7 统计学处理
3 结 果
    3.1 细胞培养
        3.1.1 细胞生长动态
        3.1.2 细胞体外扩增倍数
        3.1.3 细胞表面抗原分析
        3.1.4 集落形成能力测定
    3.2 安全性检测
        3.2.1 无菌检测
        3.2.2 外源病毒因子检测
        3.2.3 细菌内毒素检测
            3.2.3.1 细菌内毒素限值 (L) 和样品最大稀释倍数 (MVD)
            3.2.3.2 灵敏度复核试验结果见表1.
            3.2.3.3 细胞制品的干扰试验
            3.2.3.4 细胞制品内毒素检测
        3.2.4 hSCF残留量测定
        3.2.5 牛血清残留量测定
4 讨 论



本文编号：3790648