定向诱导间充质干细胞向心肌细胞方向分化过程中Nkx2.5的表达

发布时间：2017-05-20 07:11

  本文关键词：定向诱导间充质干细胞向心肌细胞方向分化过程中Nkx2.5的表达，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的以心肌组织裂解液定向诱导骨髓源性间充质干细胞分化为心肌样细胞,研究分化过程中Nkx2.5表达的变化规律,探讨分化过程中细胞形态变化与Nkx2.5表达的关联性及规律。 方法采用全骨髓贴壁培养法培养间充质干细胞,并用流式细胞仪对培养的MSCs进行鉴定,建立稳定的间充质干细胞系。选取第三代生长良好的间充质干细胞,添加心肌组织裂解液,诱导骨髓源性间充质干细胞向心肌细胞方向分化,在倒置相差显微镜下观察细胞的形态变化规律,利用connexin43和α-Actin免疫细胞化学染色对诱导后的心肌样细胞进行鉴定。根据分化中细胞形态的变化规律确定5个时间点,以半定量RT-PCR检测不同时间点Nkx2.5的表达。 结果第三代BMSCs呈纺锤形,胞浆饱满,折光性好,流式细胞仪检测CD34的阳性率为0.254%,CD45的阳性率为0.214%,CD90的阳性率为98.2%,CD29的阳性率为98.9%。诱导1d,细胞形态未发生明显改变；诱导7d,细胞形态由纺锤形细胞逐渐改变为短杆状,可见突起伸出,并且数量随着诱导时间的延长不断增多；诱导10d,杆状细胞之间的突起相互连接成网织状结构；诱导14d,短杆状的细胞端端相接,呈“竹节样”改变；诱导20d,可观察到肌管样结构的出现并逐渐增多、延长。connexin43和α-Actin免疫细胞化学染色均为阳性。NKx2.5在各时间点的相对含量分别为：(1)诱导1d：0.00；(2)诱导7d：0.14±0.06；(3)诱导10d：0.28±0.04；(4)诱导14d：0.49±0.05；(5)诱导20d：0.71±0.04。 结论连续传代扩增培养可得到纯度较高的间充质干细胞,可构建稳定的骨髓间充质干细胞系。心肌组织裂解液可定向诱导BMSCs分化为心肌细胞,激活Nkx2.5的表达,随着定向诱导分化时间的延长,Nkx2.5的表达水平逐渐增强。
【关键词】：间充质干细胞 心肌组织裂解液 定向诱导分化 Nkx2.5
【学位授予单位】：广西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 英文缩略词4-5
• 摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 前言9-11
• 1. 材料与方法11-29
• 2. 结果29-33
• 3. 讨论33-45
• 4. 结论45-46
• 5. 存在的问题与展望46-47
• 附图47-56
• 参考文献56
• 综述56-72
• 参考文献68-72
• 致谢72-73
• 攻读学位期间发表的学术论文73
• 攻读硕士学位期间参加的学术会议73

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前8条

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  本文关键词：定向诱导间充质干细胞向心肌细胞方向分化过程中Nkx2.5的表达，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：380913