钙离子对小鼠骨髓基质干细胞增殖和向肝细胞定向分化的影响

发布时间：2017-05-20 12:23

  本文关键词：钙离子对小鼠骨髓基质干细胞增殖和向肝细胞定向分化的影响，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：将骨髓基质干细胞(BMSCs)定向诱导分化成为肝细胞,进行细胞移植,以替代损伤的肝细胞,对肝病治疗有非常重要的临床价值。然而,干细胞向肝细胞分化的机理尚不清楚。本实验研究小鼠BMSCs向肝细胞定向分化过程中Ca2+的变化。 方法：无菌分离小鼠BMSCs,贴壁法纯化和扩增BMSCs。应用添加肝组织提取液(G)和鼠源β-神经生长因子(β-NGF)方案诱导BMSCs向肝细胞分化,镜下观察分化细胞的形态特征；免疫细胞化学染色法检测肝细胞的特异性标志物a-1-抗胰蛋白酶(AAT)和白蛋白(ALB)表达；吲哚靛青绿(ICG)摄取实验鉴定肝样分化细胞的离子转运功能。应用流式细胞技术对比检测BMSCs和β-NGF诱导分化细胞内的游离[Ca2+]i；并观察钙离子拮抗剂尼莫地平对干细胞的增殖和定向分化能力的影响。 实验结果：(1)肝组织提取液和β-NGF诱导后,可见分化细胞逐渐趋短变圆呈圆形和卵圆形,圆形细胞可以摄取吲哚靛青绿(ICG),呈现绿色。免疫细胞化学染色显示分化细胞呈AAT和ALB阳性表达；诱导组分化细胞的AAT表达显著性高于对照组(P0.05)；肝组织提取液和β-NGF组间的诱导作用无显著性差异(P0.05)。(2) β-NGF诱导形成的肝样分化细胞中[Ca2+]i较对照组细胞显著性升高(P0.05)。(3)加入钙离子拮抗剂尼莫地平可以阻断BMSCs向肝细胞的诱导分化,并影响细胞的增殖活性。 实验结论：(1)肝组织提取液和β-NGF均可诱导BMSCs向肝样细胞分化。(2)Ca2+在BMSCs的增殖和向肝细胞的分化过程中发挥重要的作用。
【关键词】：骨髓基质干细胞 肝细胞 诱导分化 Ca~(2+) 小鼠
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R329.2
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-7
• 第一章 实验材料7-9
• 1.1 主要试剂7-8
• 1.1.1 细胞培养试剂一览表7
• 1.1.2 溶液配制用化学试剂一览表7-8
• 1.2 主要仪器8
• 1.3 实验动物8-9
• 第二章 实验方法9-12
• 2.1 小鼠骨髓基质干细胞的分离、纯化和扩增9
• 2.2 肝组织提取液制备9
• 2.3 尼莫地平对干细胞增殖活性的影响9-10
• 2.4 BMSCs向肝细胞的分化10
• 2.5 分化细胞鉴定10
• 2.6 细胞内钙离子测定([Ca~(2+)]i)10-11
• 2.7 统计学方法11-12
• 第三章 实验结果12-16
• 3.1 尼莫地平对干细胞增殖活性的影响12-13
• 3.2 分化细胞形态学变化13-14
• 3.3 分化细胞肝细胞标志蛋白的表达14-15
• 3.4 诱导组与对照组[Ca~(2+)]i15-16
• 第四章 实验分析与讨论16-18
• 结论18-19
• 参考文献19-21
• 文献综述21-33
• 综述的参考文献28-33
• 致谢33-34
• 攻读学位期间的研究成果34-35

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前10条

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本文编号：381631