CpG寡聚核苷酸在核酸疫苗中免疫增强作用研究

发布时间：2017-05-20 12:30

  本文关键词：CpG寡聚核苷酸在核酸疫苗中免疫增强作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：细菌DNA中含有非甲基化的CpG基序,对哺乳动物细胞的免疫细胞具有免疫刺激效应,而在哺乳动物中,由于CpG基序通常以甲基化的形式存在,所以不具有免疫刺激作用。人工合成的含有非甲基化CpG基序的寡聚核苷酸即CpG ODN可以模拟细菌DNA的免疫刺激效应,提高机体的免疫反应。 白色念珠菌是一种条件致病菌。目前,主要通过一些抗真菌药类对此菌引起的相应感染疾病进行治疗,但系统性白色念珠菌感染,服用药物后致死率仍高达70%,因此研制有效的疫苗抵御白色念珠菌的感染十分重要。经研究发现,白色念珠菌热休克蛋白90(HSP90)含有三个抗原表位即B、C和H,其中表位C是保守表位,几乎能与所有系统性白色念珠菌感染的病人血清发生反应,因此将其视为候选疫苗。本实验室构建了含有白色念珠菌热休克蛋白HSP90表位C的重组质粒pD-HSP90C作为核酸疫苗,但其免疫原性较弱,需加入疫苗佐剂以加强免疫效应。 本论文对CpG ODN作为白色念珠菌核酸疫苗佐剂是否具有显著的免疫增强效用进行探讨。将CpG DNA基序构建于真核表达载体pcDNA3.1和含有HSP90C的核酸疫苗pD-HSP90C中,形成了pD-CpG和pD-HSP90C-CpG两种重组质粒。将pD-CpG与核酸疫苗pD-HSP90C联合免疫C57BL/6J小鼠、pD-HSP90C-CpG单独免疫小鼠,采用肌肉注射并电转方式,免疫两次,每次间隔时间为两周,第二次免疫两周后对小鼠进行眼球取血,收集血清进行实验研究。运用Western blot实验方法检测免疫小鼠C57BL/6J的抗血清中抗体特异性；ELISA实验测定小鼠C57BL/6J抗血清中特异性抗体IgG、IgG1、 IgG2b的抗体滴度；ELISA试剂盒测定小鼠抗血清中IL-2、IL-4的含量。 实验结果表明,pD-CpG与核酸疫苗pD-HSP90C共同免疫小鼠组以及pD-HSP90C-CpG单独免疫小鼠组,其血清中特异性抗体IgG、 IgG2b抗体滴度及IL-2含量明显高于核酸疫苗单独注射组,而特异性抗体IgG1抗体滴度并未增强、IL-4含量降低。pD-CpG联合核酸疫苗pD-HSP90C免疫小鼠与pD-HSP90C-CpG单独免疫小鼠的免疫效果相比无明显差异。本实验结果证明CpG ODN作为疫苗佐剂有效的加强了核酸疫苗pD-HSP90C的免疫效应,增强了Th1型免疫应答,下调Th2型细胞因子的表达,调节Th1/Th2比例,为CpG ODN在疫苗佐剂领域中的应用奠定坚实基础。
【关键词】：CpG ODN 核酸疫苗 佐剂
【学位授予单位】：东北师范大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R392
【目录】：

• 摘要4-5
• Abstract5-7
• 目录7-9
• 中英文~.写9-10
• 第一章 综述10-21
• 1 核酸疫苗10-13
• 1.1 核酸疫苗的研究10-11
• 1.2 核酸疫苗的优缺点11-12
• 1.3 核酸疫苗的应用及发展前景12-13
• 2 疫苗佐剂13-16
• 2.1 铝佐剂13
• 2.2 脂质体13-14
• 2.3 细胞因子14
• 2.4 乳化油佐剂14
• 2.5 皂角苷佐剂14-15
• 2.6 免疫刺激复合物(ISCOM)15
• 2.7 多肽疫苗佐剂15
• 2.8 Toll样受体激动剂15-16
• 3 CpG及其免疫作用16-19
• 3.1 CpG概述16
• 3.2 CpG免疫特性的研究16-19
• 3.3 CpG的应用前景19
• 4 白色念珠菌简介19-20
• 5 本研究目的意义20-21
• 第二章 实验材料与方法21-35
• 1 实验材料及仪器21-22
• 1.1 实验材料21
• 1.2 实验药品与试剂21-22
• 1.3 实验仪器22
• 2 实验方法22-35
• 2.1 重组质粒pD-HSP90C、pD-CpG及pD-HSP90C-CpG的制备22-26
• 2.2 重组蛋白rp-HSP90C的制备26-28
• 2.3 CpG在核酸疫苗pD-HSP90C中免疫增强作用研究28-34
• 2.4 数据分析34-35
• 第三章 实验结果与分析35-47
• 1 重组质粒pD-HSP90C、pD-CpG及pD-HSP90C-CpG的鉴定结果35-37
• 1.1 核酸疫苗pD-HSP90C的酶切鉴定结果35
• 1.2 重组质粒pD-CpG及pD-HSP90C-CpG的酶切鉴定结果35-36
• 1.3 重组质粒pD-CpG及pD-HSP90C-CpG的基因检测分析36-37
• 2 重组蛋白rp-HSP90C的纯化以及浓度测定结果分析37-38
• 2.1 重组蛋白rp-HSP90C纯化结果37
• 2.2 重组蛋白rp-HSP90C浓度测定结果37-38
• 3 CpG对核酸疫苗pD-HSP90C免疫增强作用的影响38-47
• 3.1 Western blot分析免疫小鼠抗血清中抗rp-HSP90C的抗体特异性38-40
• 3.2 CpG对免疫小鼠抗血清中抗rp-HSP90C产生特异抗体滴度的影响40-44
• 3.3 CpG对免疫小鼠抗血清中IL-2、IL-4的影响44-47
• 第四章 讨论47-49
• 1 目的基因片段的选择47
• 2 CpG增强了Th1型免疫应答47-49
• 结论49-50
• 参考文献50-55
• 致谢55

【参考文献】

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本文编号：381660