pre-B细胞中CTCF介导沉默子Sis和增强子Ei相互作用并抑制VJ重排

发布时间：2017-05-21 07:36

  本文关键词：pre-B细胞中CTCF介导沉默子Sis和增强子Ei相互作用并抑制VJ重排，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：真核细胞基因表达的精确调控需要顺势调控元件之间以及顺式调控元件和启动子之间发生直接的相互作用,这种相互作用使得基因在特定的状态下呈现特定的染色质高级结构。小鼠免疫球蛋白轻链kappa(Igκ)基因是研究细胞分化过程中染色质高级结构变化的理想模型。Igκ基因包含95个功能VK基因,4个功能JK基因,以及一个CK基因。目前已发现的Igκ因顺式调控元件包括沉默子Sis,位于内含子区域的增强子(Ei),3’增强子(E3’)和下游增强子(Ed)。前B细胞(pre-B细胞)中,VK基因带着自身启动子半随机地重排到任意的JK区域,并起始转录。Sis和Ei具有调节VJ重排的功能,Sis通过将Igκ基因定位到异染色质抑制VJ重排,而Ei通过促进"germline transcription"促进VJ重排。 CCCTC位点结合蛋白CTCF具有高度保守的锌指结构,并在基因表达调控中有重要作用,如调控基因活化和沉默,参与基因印记等。此外CTCF还能介导形成染色质内部及染色质之间的相互作用。有报道推测在pre-B细胞中CTCF结合在Sis上,然而CTCF是否介导Igκ基因的染色质高级结构,是否调控VJ的重排依然不是很清楚。 通过染色质构象捕获技术(3C)我们发现在pre-B细胞中Sis与Ei之间发生直接的相互作用,Igκ因形成一个染色质环,而在pro-B细胞中则不存在这种直接的相互作用。通过shRNA下调CTCF的表达,我们发现Ei-Sis之间的相互作用消失,同时"germline transcription"增强,VJ重排增强。这些结果说明CTCF是介导Ei-Sis相互作用的关键蛋白,而增强子和沉默子之间的相互作用能够抑制增强子的功能。因此,我们认为CTCF通过介导Sis与Ei之间的相互作用,抑制了"germline transcription"进而抑制vJ重排,参与等位基因互斥调控中的单等位基因沉默效应。
【关键词】：染色质构象捕获 转录因子 CTCF 沉默子Sis 增强子Ei VJ重排
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R3411
【目录】：

• 中文摘要4-5
• Abstract5-8
• 缩略语表8-9
• 前言9-12
• 研究现状、成果9-11
• 研究目的、方法11-12
• 1 对象和方法12-36
• 1.1 染色质构象捕获技术对象和方法12-20
• 1.1.1 实验材料12-15
• 1.1.2 实验原理15-16
• 1.1.3 技术流程16-19
• 1.1.4 对照实验的设立19-20
• 1.2 染色体免疫共沉淀技术对象和方法20-26
• 1.2.1 染色体免疫共沉淀技术实验材料20-22
• 1.2.2 染色体免疫共沉淀技术实验原理22-23
• 1.2.3 染色体免疫共沉淀（Chip)技术流程23-26
• 1.3 shRNA下调CTCF表达技术对象和方法26-32
• 1.3.1 ShRNA下调CTCF表达技术实验材料26-29
• 1.3.2 shRNA质粒的构建29-31
• 1.3.3 iCTCF-shRNA慢病毒产生和70Z/3细胞的感染31-32
• 1.3.4 Western Blot检测CTCF的基因沉默水平32
• 1.4 Igκ基因重排实验对象和方法32-36
• 1.4.1 lgx互基因重排实验材料32-34
• 1.4.2 细胞总RNA的提取及Real-time PCR检测34-35
• 1.4.3 PCR检测V_κ的重排35-36
• 2 结果36-43
• 2.1 Sis和Ei仅在pre-B细胞中存在相互作用36-39
• 2.1.1 3C对照实验的设立36-37
• 2.1.2 pro-B细胞38B9中Sis和Ei不存在相互作用37-38
• 2.1.3 pre-B细胞70Z/3中Sis和Ei存在相互作用38-39
• 2.2 在70Z/3细胞中CTCF结合于Sis片段39
• 2.3 shRNA质粒的构建39-41
• 2.3.1 pSPR-iCTCF质粒的鉴定39-40
• 2.3.2 277-iCTCF质粒的鉴定40-41
• 2.4 70Z/3细胞中CTCF下调后Sis与Ei相互作用消失41-42
• 2.5 CTCF通过抑制Igκ基因germline的转录从而抑制VJ重排42-43
• 3 讨论43-45
• 结论45-46
• 参考文献46-50
• 发表论文和参加科研情况说明50-51
• 综述51-63
• 综述参考文献58-63
• 致谢63

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 李紫聪;黄晓灵;刘德武;吴珍芳;;转基因动物生物反应器研究进展[J];广东畜牧兽医科技;2013年04期

2 Anfei Liu;Xiya Yu;Shanrong Liu;;Pluripotency transcription factors and cancer stem cells:small genes make a big difference[J];Chinese Journal of Cancer;2013年09期

3 常胜合;徐立;李敬阳;孙威;王甲水;许桂莺;孙佩光;吴琼;金志强;舒海燕;;提高香蕉胚性愈伤诱导成功率的可能途径[J];安徽农业科学;2013年19期

4 姜英浩;张菊;卢兹凡;;干细胞伦理之争的“终结者”——谈诺贝尔生理学与医学奖获得者山中伸弥[J];医学争鸣;2013年05期

5 徐丽萍;龙大宏;校对;;诱导多能干细胞及其在神经再生医学的应用前景[J];解剖学研究;2013年05期

6 Jian Shu;Hongkui Deng;;Lineage Specifers:New Players in the Induction of Pluripotency[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

7 Xiao-Bing Zhang;;Cellular Reprogramming of Human Peripheral Blood Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

8 Wenwen Jia;Wen Chen;Jiuhong Kang;;The Functions of MicroRNAs and Long Non-coding RNAs in Embryonic and Induced Pluripotent Stem Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

9 Yi-ye Zhou;Fanyi Zeng;;Integration-free Methods for Generating Induced Pluripotent Stem Cells[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

10 Menghua Wu;Guilai Chen;Baoyang Hu;;Induced Pluripotency for Translational Research[J];Genomics,Proteomics & Bioinformatics;2013年05期

中国重要会议论文全文数据库 前2条

1 周灿权;李宇彬;;研究中的生殖医学技术[A];中华医学会生殖医学分会第二次全国生殖临床学术研讨会论文汇编[C];2012年

2 张可华;袁宝珠;;治疗性干细胞产品相关的风险因素[A];2012年中国药学大会暨第十二届中国药师周论文集[C];2012年

中国博士学位论文全文数据库 前10条

1 邱湘宁;DNA甲基化抑制剂5-氮杂胞苷和5-氮杂-2'-脱氧胞苷对编码和非编码RNA表达的影响[D];中南大学;2010年

2 贾蓓;A型血友病人非整合诱导多能干细胞建系及其细胞疾病模型的建立[D];南方医科大学;2012年

3 申晶;骨髓源间充质干细胞输注促进STZ诱导的糖尿病大鼠胰腺内α细胞向β细胞的转变：糖尿病治疗的新模式[D];中国人民解放军军医进修学院;2013年

4 朱玉德;胶质瘤干细胞的生物学特性及其与胶质瘤血管发生的关系[D];苏州大学;2013年

5 贾园荟;组蛋白去甲基化酶PHF8参与神经分化的研究与UHRF1、UHRF2调控起始性DNA甲基化的功能研究[D];华东师范大学;2013年

6 丛义梅;猪原始生殖细胞体内跟踪、体外培养及遗传印记的研究[D];东北农业大学;2013年

7 高国振;宿主因子Cyclin T1和Sam68在Ⅰ型人免疫缺陷型病毒生活周期中的功能研究[D];武汉大学;2012年

8 陈雪梅;人胚胎干细胞传代培养和神经诱导分化过程中基因组遗传变异的动态变化[D];郑州大学;2013年

9 李远;杂合型重编程Oct4联合多能干细胞因子表现重编程人脑胶质瘤细胞的研究[D];郑州大学;2013年

10 王兵;生物芯片和纳米中药对肝胆肿瘤早期诊治的研究[D];华中科技大学;2013年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 王振;造血系统关键转录因子的慢病毒载体构建及表达[D];山东师范大学;2013年

2 陈明;骨髓单个核细胞在脑缺血大鼠脑内受损区域的定向分化[D];郑州大学;2013年

3 费璇;KLF4在大鼠晶状体损伤促进视神经再生过程中的表达[D];郑州大学;2013年

4 雷学华;重编程因子对小鼠组蛋白H3K4/27甲基化酶基因启动子活性的影响[D];安徽大学;2013年

5 薛飞;盐藻丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶基因DsSTPK的克隆和表达分析[D];大连海洋大学;2013年

6 邓玉金;应用小鼠ESCs体外诱导己分化体细胞为iPSCs的异性来源鉴别体系研究[D];西南大学;2013年

7 赵龙彪;乌司他丁对急性心肌梗死大鼠心脏的保护作用[D];河北医科大学;2013年

8 曹玲玲;Hemin诱导K562细胞向红系细胞分化和胞质杂交体的蛋白质组学及NPM1功能的初步研究[D];浙江理工大学;2013年

9 杨宝田;胚胎干细胞来源的畸胎瘤干细胞研究[D];浙江理工大学;2013年

10 宋庆峰;HBV相关肝细胞癌遗传易感区域1p36.22的精细定位研究[D];广西医科大学;2013年

  本文关键词：pre-B细胞中CTCF介导沉默子Sis和增强子Ei相互作用并抑制VJ重排，由笔耕文化传播整理发布。

，

本文编号：382900