人羊膜间充质干细胞微载体悬浮培养及成骨诱导

发布时间：2023-06-03 15:43

　　人羊膜间充质干细胞(Human Amnion Mesenchymal Cells, hAMCs)不仅具有向三个胚层方向分化的能力,而且易获得,伦理争议小,具抗炎性和免疫耐受性等优点,因此在科学研究及临床应用中极具潜力。 本文考察hAMCs在微载体动态与二维静态培养体系中的扩增、代谢及对数生长期收获的细胞集落形成能力、多向分化能力；并进一步比较了hAMCs在微载体动态和二维静态成骨诱导体系中的增殖、代谢及成骨分化,初步探讨了微载体培养体系中流体刺激与I型胶原包被对在成骨诱导培养基中生长的hAMCs的增殖与成骨分化的影响,以期建立集扩增和分化诱导为一体的hAMCs体外培养系统。 研究结果表明,在微载体cytodex3悬浮培养系统中采用间歇搅拌、4%FBS、半量体积接种后,贴附率提高至(86.3±2.5)%,hAMCs培养12d后,获得的最高细胞数是二维静态培养的26倍。与二维静态培养相比,微载体培养条件下hAMCs的葡萄糖利用率更高,收获的细胞具有更高的集落形成率(P<0.05)、成骨和成脂肪的潜能(P<0.05)。在14d的成骨诱导培养中,微载体动态诱导培养体系中获得的最高细...

【文章页数】：71 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第1章 文献综述
    1.1 间充质干细胞概述
        1.1.1 间充质干细胞的发现
        1.1.2 间充质干细胞的表型
        1.1.3 间充质干细胞的分化潜能
        1.1.4 间充质干细胞的应用价值
    1.2 胎膜来源的间充质干细胞
    1.3 影响间充质干细胞体外培养的因素
        1.3.1 培养基
        1.3.2 血清
        1.3.3 生长因子
        1.3.4 接种密度
        1.3.5 渗透压及pH
        1.3.6 培养方式
    1.4 本文的研究目的及意义
第2章 微载体培养体系中人羊膜间充质干细胞扩增
    2.1 概述
    2.2 材料与方法
        2.2.1 hAMCs的分离和培养
        2.2.2 转瓶硅化处理
        2.2.3 微载体预处理
        2.2.4 细胞接种
        2.2.5 转瓶换液和取样
        2.2.6 细胞计数
        2.2.7 贴附曲线测定
        2.2.8 生长曲线测定
        2.2.9 乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)活性检测
        2.2.10 葡萄糖和乳酸的测定
        2.2.11 渗透压及pH测定
        2.2.12 扫描电镜观察
        2.2.13 培养细胞的收获
        2.2.14 集落形成率测定
        2.2.15 表面标志分析
        2.2.16 成骨诱导
        2.2.17 茜素红染色
        2.2.18 hAMCs脂肪诱导
        2.2.19 油红染色
        2.2.20 统计学方法
    2.3 结果与讨论
        2.3.1 细胞接种
        2.3.2 细胞接种过程优化及细胞生长
        2.3.3 细胞形态
        2.3.4 葡萄糖与乳酸代谢
        2.3.5 渗透压与pH
        2.3.6 微载体培养系统中收获的细胞的功能鉴定
    2.4 本章小节
第3章 微载体诱导体系中人羊膜间充质干细胞的成骨分化
    3.1 概述
    3.2 材料与方法
        3.2.1 hAMCs的分离和培养
        3.2.2 转瓶硅化处理
        3.2.3 微载体预处理
        3.2.4 细胞接种
        3.2.5 成骨诱导
        3.2.6 细胞计数
        3.2.7 葡萄糖和乳酸的测定
        3.2.8 渗透压及pH测定
        3.2.9 碱性磷酸酯酶(ALP)活性的测定
        3.2.10 胞外钙基质含量测定
        3.2.11 统计学方法
    3.3 结果与讨论
        3.3.1 hAMCs的形态
        3.3.2 hAMCs的增殖
        3.3.3 葡萄糖与乳酸代谢
        3.3.4 渗透压及pH测定
        3.3.5 成骨分化
    3.4 本章小结
第4章 流体刺激与Ⅰ型胶原对人羊膜间充质干细胞成骨分化的影响
    4.1 概述
    4.2 材料与方法
        4.2.1 hAMCs的分离及培养
        4.2.2 转瓶硅化处理
        4.2.3 微载体预处理
        4.2.4 胶原包被
        4.2.5 流体刺激
        4.2.6 细胞接种及培养
        4.2.7 成骨诱导
        4.2.8 葡萄糖和乳酸的测定
        4.2.9 碱性磷酸酯酶(ALP)活性的测定
        4.2.10 胞外钙基质含量测定
        4.2.11 茜素红染色
        4.2.12 统计学方法
    4.3 结果与讨论
        4.3.1 微载体诱导体系中动态培养和静态培养对hAMCs成骨分化的影响
        4.3.2 流体刺激与Ⅰ型胶原对hAMCs成骨分化的影响
        4.3.3 流体刺激与胶原包被对hAMCs成骨分化的作用
    4.4 本章小节
第5章 全文总结与展望
参考文献
致谢



本文编号：3829581