结核分枝杆菌抗原的制备及其在诊断中的应用

发布时间：2017-05-21 21:09

  本文关键词：结核分枝杆菌抗原的制备及其在诊断中的应用，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的目前结核病的检测方法多种多样，免疫学检测方面主要包括基于细胞免疫的检测方法和基于体液免疫的检测方法。基于细胞免疫的检测包括皮肤试验和细胞因子的检测。基于体液免疫的检测包括抗原检测和抗体检测。免疫学检测获得较高敏感性和特异性的关键在于抗原的选择，选择出特异性好，敏感性高的结核分枝杆菌抗原在结核病检测方面具有重要意义。本课题主要是对结核分枝杆菌RD1区多种和Rv3452抗原进行制备，并研究制备出的结核分枝杆菌抗原在结核病诊断中的应用价值。 方法根据文献报道，从TB databases数据库（http://tb.lanl.gov/content/index）下载结核分枝杆菌H37Rv菌株RD1区及Rv3452抗原的核苷酸序列和氨基酸序列。运用Biosun生物软件分析RD1区及Rv3452抗原表位分布情况，筛选峰值较高表位区段，而后截取其相应氨基酸序列和基因序列设计引物，采用分子克隆技术克隆相应基因，分别构建原核表达载体，诱导表达并纯化抗原，建立间接ELISA方法，检测患者血清中相应IgG抗体的水平。 结果通过原核表达载体，共成功获得了5种RD1去抗原、全长Rv3452抗原和Rv3452-2区段抗原。在初步筛选出特异性和敏感性比较好的抗原的基础上扩大检测样本，并把样本进行分组。本实验所用样本分为三组，第一组为涂片和培养共同阳性组（83例），第二组为涂片阴性且培养阳性组（48例），第三组为涂片和培养共同阴性组（79例）。通过间接ELISA法进行检测，结果显示7个抗原敏感性分别为56.19%、26.67%、65.7%、58.57%、60.48%、70.85%和65.24%。Rv3871、Rv3874、Rv3875、Rv3876、Rv3879、Rv3452和Rv3452-2抗原痰培养阳性组的检出率分别为54.19%、59.54%、27.48%、54.96%、55.73%、70.8%和58.7%。Rv3871、Rv3874、Rv3875、Rv3876、Rv3879、Rv3452和Rv3452-2抗原对痰涂片检测为阴性组的检出率分别为62.21%、73.22%、25.98%、58.26%、66.92%、69.29%和69.29%。Rv3871、Rv3874、Rv3875、Rv3876、Rv3879、Rv3452和Rv3452-2抗原对痰培养阴性组的检出率为59.49%、78.48%、25.31%、65.82%、68.35%、70.88%和75.94%。Rv3871、Rv3874、Rv3875、Rv3876、Rv3879、Rv3452和Rv3452-2抗原血清学法检测检出率分别为56.19%、65.7%、26.67%、58.57%、60.48%、70.85%和65.24%。而对相同的样本涂片法的检出率为39.52%，，培养法的检出率为62.38%。结果比较可得CFP-10（Rv3874）、Rv3452和Rv3452-2三个抗原的检出率高于培养法的检出率，同时这七个抗原除ESAT-6（Rv3875）抗原外其它抗原的检出率均高于涂片法的检出率。为了了解临床治疗过程中患者的IgG抗体变化水平并评价这些抗原在抗结核治疗效果评价中的应用价值，我们选取了88例治疗过程中的活动性肺结核患者的系列血清，分别为治疗0个月、2个月、4个月和6个月的血清样本。对以上标本中IgG抗体水平变化进行检测。结果显示7种抗原在88例结核病患者血清样本中的检出率分别为69.3%、73.8%、51.1%、84.1%、71.5%、68.1%和67.1%。其中OD值水平下降的患者所占的比率分别为47.5%、44.6%、40%、37.8%、31.7%、48.3%和45.7%。OD值上升的患者所占的比例分别为27.8%、35.7%、40%、31.1%、39.6%、40%和30.5%。OD值不变的患者所占的比例分别为24.6%、20%、20%、31.1%、28.5%、11.6%和23.7%，由此结果可得治疗过程中IgG抗体下降的患者所占的比例较大。 结论结核病患者体内存在针对RD1区和Rv3452不同抗原的特异性抗体，而且不同抗原之间存在互补性。结核病患者体内抗体可以长期存在，在抗结核治疗期间呈现不同的变化趋势。血清学检测法灵敏度高、快速、操作简便、特异性强，可以作为细菌学检测的有效补充。
【关键词】：结核病 RD1区抗原 Rv3452抗原 检测
【学位授予单位】：河北联合大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R378.911;R392
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-10
• 英文缩略表10-11
• 引言11-14
• 第1章 实验研究14-51
• 1.1 材料与方法14-20
• 1.1.1 实验材料14-16
• 1.1.2 实验方法16-20
• 1.2 结果20-41
• 1.2.1 抗原表位的确定20-23
• 1.2.2 七种抗原基因片段的获得23
• 1.2.3 表达载体的构建及表达菌株的鉴定23-26
• 1.2.4 目的蛋白的纯化及纯度和分子量的鉴定26-28
• 1.2.5 抗原活性的初步鉴定28-29
• 1.2.6 七个抗原分组血清的检测29-36
• 1.2.7 七个抗原对治疗不同时间患者系列血清的检测36-41
• 1.3 讨论41-47
• 1.4 结论47
• 参考文献47-51
• 第2章 综述 重组结核分枝杆菌抗原在结核病诊断中的应用51-58
• 2.1 结核病免疫学检测方法51-52
• 2.1.1 基于细胞免疫的检测方法51-52
• 2.1.2 基于体液免疫的检测方法52
• 2.2 结核分枝杆菌抗原的研究现状及重组抗原的选择52-53
• 2.2.1 胞外分泌型抗原52
• 2.2.2 细胞抗原52-53
• 2.2.3 毒力蛋白53
• 2.3 重组结核分枝杆菌抗原的应用53-55
• 2.3.1 重组抗原对活动性结核病患者的诊断53
• 2.3.2 重组抗原对潜伏性结核病患者的诊断53-54
• 2.3.3 重组抗原对 TB/HIV 共感染患者的诊断54
• 2.3.4 重组抗原对儿童结核病患者的诊断54-55
• 2.3.5 重组抗原对肺外结核的诊断中的诊断55
• 2.4 总结55-56
• 参考文献56-58
• 致谢58-59
• 导师简介59-60
• 作者简介60-62
• 学位论文数据集62

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

1 刘海英;徐德兴;;结核分枝杆菌抗原及其在结核病诊断中的研究进展[J];国际呼吸杂志;2006年04期

2 李丽玲;熊礼宽;张涛;;结核分枝杆菌诊断抗原的性质和应用[J];临床肺科杂志;2010年06期

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4 冯晓燕;Albert W.Tam;陈坤;王国华;宋晓国;朱翠侠;张贺秋;;结核分枝杆菌4种抗原的基因克隆、表达、纯化和抗原性初步检测[J];生物技术通讯;2006年06期

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本文编号：384830