3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程与磷脂转运蛋白基因表达水平的相关性研究

发布时间：2017-05-23 15:07

  本文关键词：3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程与磷脂转运蛋白基因表达水平的相关性研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的 比较正常人和肥胖患者的血清磷脂转运蛋白（Phospholipid transfer protein, PLTP）活性，初步了解PLTP与肥胖（Obesity）的关系。研究体外培养的小鼠胚胎成纤维细胞（3T3-L1前脂肪细胞）在诱导分化过程中PLTP基因表达的变化，探究其与前脂肪细胞分化及脂质聚集之间的关系，进一步阐述PLTP对肥胖和动脉粥样硬化（Atherosclerosis, AS）的影响，为治疗肥胖和动脉粥样硬化提供新的途径。 方法 1.检测正常人和肥胖患者血清PLTP活性：选取50-60岁正常人（18.5≤体重指数（Body Mass Index, BMI）25）和肥胖患者（30≤BMI）各11例，抽血离心后取血清，用人磷脂转运蛋白活性检测试剂盒检测血清中PLTP活性，研究正常人和肥胖患者血清PLTP活性有何区别。 2.培养及诱导3T3-L1前脂肪细胞：用增殖培养基体外培养3T3-L1前脂肪细胞，接种六孔板待长满后继续用增殖培养基培养2-3天，之后联合应用1-甲基-3-异丁基黄嘌呤(1-methyl-3-isobutyl xan, IBMX)、地塞米松（Dexamethasone）、胰岛素(Insulin)2天诱导3T3-L1前脂肪细胞分化，在以后诱导过程中用胰岛素维持培养。 3.诱导细胞进行油红O染色：分别取诱导第0、2、4、8、11、14天细胞进行油红O染色，倒置显微镜观察细胞形态变化及脂质聚集情况。 4.检测3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中PLTP mRNA的变化：分别取诱导第0、2、4、6、9、12天细胞提取总RNA，通过荧光定量PCR检测PLTP mRNA的表达变化。 5.检测3T3-L1前脂肪细胞诱导分化过程中PLTP蛋白的变化：分别取诱导第0、2、4、6、9、12天细胞提取总蛋白，western blot检测PLTP蛋白的变化。 结果 1.检测50-60岁正常人和肥胖患者血清得出肥胖患者血清PLTP活性较正常人高，约为正常人的2倍，为后续探究PLTP随3T3-前脂肪细胞的诱导分化而变化奠定理论基础。 2.3T3-L1前脂肪细胞经油红O染色，肉眼可见培养皿底随诱导天数增加染色颜色加深。倒置显微镜下，随诱导天数增加，，细胞体积增大变圆，第11天及以后含有红色脂滴的成熟脂肪细胞在视野中占90%以上。 3. PLTP mRNA的变化：随着3T3-L1前脂肪细胞诱导分化的成熟，PLTP mRNA表达量逐渐增加，第2、4天PLTP mRNA表达量增加不明显，无统计学意义（P0.05）。分化至第6、9、12天明显增高，分别比诱导第0天增加3.3倍（P0.01）、3.7倍（P0.01）和5倍（P0.01）。 4. PLTP蛋白的变化：通过western blot实验结果，可以看出在诱导分化不同阶段，PLTP蛋白表达水平与mRNA表达基本一致，在诱导第2、4天，PLTP蛋白表达量变化不明显，无统计学意义（P0.05）。在诱导第6、9、12天达到较高水平，较诱导第0天分别增加3.2倍（P0.05）、4.1倍（P0.01）和3.4倍（P0.05）。 结论 1.肥胖患者比正常人血清PLTP活性高，说明PLTP和肥胖成正相关。 2.随着3T3-L1前脂肪细胞诱导天数增加，前细胞逐渐分化为成熟脂肪细胞，在第11天诱导率达到最高水平，以后随天数增加成熟脂肪细胞不再增加。PLTP的mRNA水平与细胞内脂质含量同步增加。 3. PLTP蛋白水平随3T3-L1前脂肪细胞诱导天数增加而增多，说明PLTP的蛋白含量与细胞成熟同步，提示PLTP有可能参与甚至调节成熟过程。
【关键词】：磷脂转运蛋白 3T3-L1前脂肪细胞 脂肪细胞分化 脂质聚集
【学位授予单位】：泰山医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R363
【目录】：

• 中文摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 符号说明9-11
• 前言11-16
• 材料与方法16-33
• 结果33-35
• 讨论35-39
• 结论39-40
• 附图40-43
• 参考文献43-48
• 综述48-57
• 参考文献54-57
• 致谢57-58
• 攻读学位期间发表的学术论文58
• 攻读硕士学位期间参与的课题研究58

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 秦树存;叶平;;磷脂转运蛋白的生物学特性及其与脂蛋白代谢相关疾病的关系[J];中华老年心脑血管病杂志;2008年08期

2 黄俊军,周新;磷脂转运蛋白的研究[J];生命的化学;1999年02期

3 焦谊;王延蛟;李俊红;周众;韩春晨;孙丽丽;连政;张成;关亚群;;3T3-L1前脂肪细胞分化过程中chemerin基因表达水平的变化[J];中国老年学杂志;2011年21期

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本文编号：388284