小鼠着床窗口期子宫内膜胚胎着床点及其旁组织microRNA差异表达及功能

发布时间：2017-05-23 17:30

  本文关键词：小鼠着床窗口期子宫内膜胚胎着床点及其旁组织microRNA差异表达及功能，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的： 子宫内膜在着床窗期发生一系列变化以适应胚胎植入，而胚胎的成功植入有赖于胚胎着床点与着床旁的基因表达差异。microRNA(miRNA)作为基因表达调节器，已被证实在小鼠胚胎着床点与着床旁存在差异表达，参与胚胎着床的调控。为更好的了解miRNA对胚胎着床的调控作用及其机制，应用microRNA芯片和基因芯片对小鼠着床窗口期（孕5天）子宫内膜着床点及其旁组织差异表达的miRNAs和mRNAs进行筛选，通过联合分析芯片数据，获得着床点表达差异的信号通路，进而找到起重要作用的关键miRNAs，为探讨小鼠胚胎着床的分子机制打下基础。 方法： 1.标本收集：收集小鼠孕5天子宫内膜着床点和着床旁组织。 2. microRNA芯片分析：Trizol法提取样本总RNA，将RNA用miRCURYTM Array Power Labeling kit (Cat#208032-A, Exiqon,Denmark)按说明书操作步骤进行标记。标记后的RNA在miRCURYTMArray (Exiqon, Denmark)进行杂交反应。用Axon GenePix4000B芯片扫描仪进行图像扫描，GenePix pro V6.0软件进行数据分析。 3.基因芯片分析：Trizol法提取样本总RNA，用Quick AmpLabeling Kit(Agilent)标记，，利用Agilent Gene Expression HybridizationKit (Agilent)进行杂交，经Gene Expression Wash Buffer(Agilent)洗涤后通过芯片扫描仪(Agilent)扫描图像，最后利用Agilent Feature Extraction软件分析数据。 4.荧光定量PCR验证：依照miRNA成熟序列设计对应的特异性逆转录引物和PCR上下游引物，采用U6作为内参，进行荧光定量PCR验证；随机选取基因芯片数据中部分基因，进行荧光定量PCR验证。 5.生物信息学分析：运用miRNA靶基因预测数据库Targetscan、Pictar、miRBase检索差异表达的miRNAs靶基因，再将所得靶基因与基因芯片数据进行比对，与差异表达的基因求交集得到在小鼠孕5天子宫内膜中的潜在靶基因。利用数据库GO和KEGG对所得靶基因进行功能分析，并进行负相关运算绘制负调控网络，进而得到关键miRNAs。 结果： 1. miRNA芯片显示：与着床旁相比，在着床点上调超过2倍及以上的miRNAs有30个，下调超过2倍及以上的有42个。 2.荧光定量PCR结果显示：随机选取的miRNAs和mRNAs表达趋势与芯片数据一致。 3.生物信息学分析：通过将Targetscan、Pictar、miRGen数据库所得预测靶基因与基因芯片所得差异基因求交集得到差异表达miRNAs在子宫内膜的潜在靶基因；将这些靶基因进行功能分析得到着床点有20个信号通路上调、14个信号通路下调；通过负相关运算得到负相关网络图，进而筛选出关键miRNAs。 结论： 1.芯片结果证实小鼠孕5天子宫内膜着床点和着床旁组织存在差异表达的miRNAs（如上调的miR-21、miR-96、miR-30b，下调的miR-298），提示miRNAs在胚胎着床过程中起一定的调控作用。 2.利用荧光定量PCR对部分差异表达的miRNAs和基因芯片数据中部分基因的表达进行检测，证实芯片数据可靠。 3.经生物信息学分析，得到差异表达的miRNAs的负相关靶基因和着床点上调的信号通路（细胞粘附因子、NK细胞相关通路等）以及可能起重要作用的关键miRNAs（miR-96、miR-30b等），miRNAs可能通过相关信号通路调控胚胎着床。
【关键词】：miRNA 胚胎着床 生物信息学
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2013
【分类号】：R321
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 摘要7-10
• ABSTRACT10-14
• 前言14-15
• 1 材料15-16
• 2 方法16-22
• 3 结果22-34
• 4 讨论34-37
• 全文小结与展望37-38
• 参考文献38-41
• 文献综述41-47
• 参考文献44-47
• 致谢47-48
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文48-49

【参考文献】

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1 鲁之中;陈雪梅;曾兰;何俊琳;王应雄;丁裕斌;黄玲;刘学庆;;早孕小鼠胚胎着床前后子宫内膜microRNAs差异表达[J];细胞生物学杂志;2009年06期

  本文关键词：小鼠着床窗口期子宫内膜胚胎着床点及其旁组织microRNA差异表达及功能，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：388647