SM22α泛素化对PDGF-BB诱导的VSMC增殖的影响

发布时间：2017-05-24 08:23

  本文关键词：SM22α泛素化对PDGF-BB诱导的VSMC增殖的影响，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的：泛素化修饰是一种重要的翻译后修饰方式,受到细胞外信号的严格调控。我室研究证明，PDGF-BB可以诱导血管平滑肌细胞(VSMC)标志物——SM22α发生磷酸化和泛素化,并且该过程与SM22α蛋白表达水平下调具有时相相关性。因此，我们推测SM22α发生泛素化可能对VSMC的增殖产生影响。本研究通过转染SM22α及其泛素化突变体，观察SM22α泛素化修饰对PDGF-BB诱导的VSMC增殖的影响，探讨SM22α泛素化修饰的意义及其分子机制。 方法与结果： 1PDGF-BB对VSMC细胞增殖活性的影响 MTT和细胞计数分析结果显示，PDGF-BB刺激12h时，VSMC增殖活性显著升高，24h时达到高峰，呈时间依赖性。 2PDGF-BB对SM22α泛素化水平的影响 免疫共沉淀结果显示，PDGF-BB作用于VSMC12h，SM22α的泛素化水平显著增高，24h达高峰，48h时仍维持在较高水平。该变化与细胞增殖活性增加趋势相吻合，且具有时相相关性。 3HA-SM22α与泛素化位点突变体的构建与鉴定 分别构建HA-SM22α和HA-SM22α泛素化位点突变的融合蛋白表达质粒，，重组质粒经PCR扩增、EcoR I/Xho I双酶切及测序鉴定后，命名为HA-SM22α、HA-SM22α(K17R)、HA-SM22α(K20R)、HA-SM22α(K21R)、HA-SM22α(K89R)和HA-SM22α(K121R)。 4SM22α泛素化突变体对PDGF-BB诱导的VSMC增殖的影响 利用siRNA敲低内源性SM22α的表达，分别将SM22α野生型(WT)及泛素化突变体转染VSMC，然后用PDGF-BB刺激24h。MTT和细胞计数分析结果表明，野生型HA-SM22α可以抑制PDGF-BB诱导的VSMC增殖，而HA-SM22α(K21R)则增强PDGF-BB的促增殖活性。 5SM22αK21泛素化突变体对PDGF-BB诱导的PCNA表达的影响 利用siRNA敲低内源性SM22α后，过表达野生型SM22α及K21泛素化突变体SM22α(K21R)，再给予PDGF-BB刺激24h。Western Blot结果显示，PDGF-BB可诱导PCNA的表达，转染野生型HA-SM22α显著抑制PDGF-BB诱导的PCNA表达上调，而转染HA-SM22α(K21R)则不具有这样的抑制作用。 6SM22αK21泛素化突变体对PDGF-BB诱导的ERK1/2信号通路的影响 利用siRNA敲低内源性SM22α，然后过表达野生型SM22α及K21泛素化突变体SM22α(K21R)，再给予PDGF-BB刺激30min。Western Blot结果提示，HA-SM22α(K21R)突变体丧失对ERK1/2增殖信号通路的抑制作用。 结论： 1PDGF-BB可以诱导SM22α发生泛素化。 2HA-SM22α(K21R)失活突变体丧失对ERK1/2信号通路激活和VSMC增殖的抑制作用。
【关键词】：血管平滑肌细胞 细胞增殖 平滑肌22α 泛素化
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R3416
【目录】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 前言9-10
• 材料与方法10-16
• 结果16-19
• 附图19-27
• 讨论27-29
• 结论29
• 参考文献29-32
• 综述 蛋白质 SUMO 化修饰的研究进展32-44
• 参考文献39-44
• 致谢44-45
• 个人简历45

  本文关键词：SM22α泛素化对PDGF-BB诱导的VSMC增殖的影响，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：390260