乙型脑炎病毒的适应性传代及规模化培养

发布时间：2017-05-25 06:12

  本文关键词：乙型脑炎病毒的适应性传代及规模化培养，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：本研究目的是完成乙型脑炎病毒（Japanese encephalitis virus，JEV）在Vero细胞上的适应性、传代稳定性研究及病毒培养条件的优化。 将JEV在Vero细胞上连续适应性传代20代次，，通过检测各代次毒力，考察JEV在Vero细胞上的适应情况；结果显示，JEV在Vero细胞上适应性良好，所传各代次病毒滴度均大于8.5lgLD50/ml。 以RT-PCR法扩增P3V0、P3V1、P3V5、P3V10、P3V15及P3V20代次病毒的E基因片段，测序分析，考察JEV在Vero细胞上的遗传稳定性；结果显示，E基因片段测序分析未发生碱基变化，传代稳定性良好。 病毒静置培养状态下，实现培养规模放大，改变包括维持液pH值、培养温度、病毒感染复数（Multiplicity of infection，MOI）及培养方式在内的相关影响因素，优化病毒培养模式；建立JEV二级毒种库，并进行全面检定。结果显示，当病毒维持液pH值为7.2~7.4、培养温度为34℃、病毒接种MOI为0.01或0.1且以单层接种法接种病毒时，病毒滴度最高。完成JEV在Vero细胞上的适应性传代培养，为实现Vero细胞基质的JEV疫苗研发奠定基础。
【关键词】：乙型脑炎病毒 Vero细胞 感染复数 毒种库
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2014
【分类号】：R373.31
【目录】：

• 中文摘要4-5
• ABSTRACT5-8
• 第1章 绪论8-18
• 1.1 乙型脑炎病毒病原学研究进展8-9
• 1.2 乙型脑炎发病机制9
• 1.3 乙型脑炎的诊断9-10
• 1.4 乙型脑炎疫苗研究进展10-11
• 1.4.1 传统疫苗10
• 1.4.2 新型疫苗10-11
• 1.5 Vero 细胞及其在病毒性疫苗研发中的应用11-12
• 1.5.1 Vero 细胞的特性11-12
• 1.5.2 Vero 细胞的应用12
• 1.6 生物反应器动物细胞大规模培养技术12-16
• 1.6.1 生物反应器技术发展现状13-14
• 1.6.2 生物反应器的类型及特点14-15
• 1.6.3 反应器细胞培养工艺和代谢调控研究15-16
• 1.7 课题的立题依据16-17
• 1.8 课题研究的主要内容17-18
• 第2章 乙型脑炎病毒的适应性传代18-30
• 2.1 材料与方法18-19
• 2.1.1 细胞、病毒与试剂18
• 2.1.2 实验动物18-19
• 2.2 方法与结果19-29
• 2.2.1 乙型脑炎病毒病在 Vero 细胞上传代适应19-20
• 2.2.2 乙型脑炎病毒病静置培养条件的研究20-23
• 2.2.3 乙型脑炎病毒病接种方式的研究23
• 2.2.4 病毒培养规模放大研究23-24
• 2.2.5 乙型脑炎病毒病传代稳定性研究24-26
• 2.2.6 病毒库的建立与检定26-29
• 2.3 本章小结29-30
• 第3章 生物反应器大规模培养30-35
• 3.1 仪器及试剂30-31
• 3.2 方法与结果31-35
• 3.2.1 Vero 细胞的接种与培养31-32
• 3.2.2 乙型脑炎病毒的接种与培养32-35
• 第4章 讨论35-39
• 4.1 乙型脑炎病毒适应性传代及相关研究35-37
• 4.1.1 病毒的适应性传代35
• 4.1.2 乙型脑炎病毒培养条件的优化35-37
• 4.2 乙型脑炎病毒的生物反应器大规模培养37-39
• 4.2.1 Vero 细胞的培养37
• 4.2.2 乙型脑炎病毒的培养37-39
• 第5章 总结39-40
• 5.1 乙型脑炎病毒的适应性传代研究39
• 5.2 最佳培养条件的研究39
• 5.3 乙型脑炎病毒规模化培养的研究39-40
• 参考文献40-43
• 致谢43

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