人脑金属硫蛋白MT3结构对其性质和功能的影响

发布时间：2024-03-26 19:12

　　阿尔茨海默氏症 (Alzheimer’s disease, AD) 是一种中枢神经系统原发性退行性变性疾病,临床主要表现为认识能力降低、行为异常及日常生活能力逐渐下降而需要照顾。统计结果表明,Alzheimer’s disease是威胁老年人群健康的主要病种之一,85岁以上人群发病率可高达50%。美国1994年仅花费在Alzheimer’s disease病人护理上的费用就高达1100亿美元。迄今为止,Alzheimer’s disease的病因及发病机制还是个不解之谜。然而,大量研究结果表明,AD的发生是多病因相互作用的结果,可能存在多种致病机制。全面、深入地了解各种致病机制对于最终征服AD具有重大的意义。 研究发现,AD患者大脑中缺乏一种神经元的抑制因子,即神经生长抑制因子 (Growth Inhibitory Factor, GIF)。该因子的缺少致使AD病人脑中神经营养活性增高,从而导致神经元过度生长。这种畸态的生长使得大脑营养水平供不应求,并最终导致了神经元的纤维化。这也是AD可能的致病机制之一。 从结构上看,GIF应该属于金属硫蛋白家族,因此它也被命名为MT3。从一级结构上...

【文章页数】：171 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 序论
    第一节 Alzheimer’s Disease简介
    第二节 从神经生长抑制因子(GIF)到MT3
    第三节 MT3的研究概况
        1.3.1 MT3的分布
        1.3.2 MT3的表达调控
        1.3.3 MT3的功能
        1.3.4 MT3的结构
        1.3.5 MT3的性质
    第四节 MT3在MT家族中的特异性
    参考文献
第二章 MT3的结构、性质研究
    第一节 人脑MT3的基因构建、表达、纯化及鉴定
        2.1.1 人脑MT3的基因构建
        2.1.2 MT3蛋白的表达和纯化方案
        2.1.3 MT3的纯度鉴定
        2.1.4 MT3的重组
    第二节 MT3的结构探索
        2.2.1 MT3中的金属含量
        2.2.2 MT3的柱层析研究
        2.2.3 MT3的光谱性质研究
        2.2.4 MT3的立体结构
            2.2.4.1 1H NMR研究
            2.2.4.2 15N NMR研究
            2.2.4.3 113Cd NMR研究
    第三节 MT3的性质研究
        2.3.1 MT3的稳定性
            2.3.1.1 MT3的热稳定性
            2.3.1.2 MT3的化学稳定性
            2.3.1.3 MT3对抗生物酶水解的稳定性
        2.3.2 MT3的反应性质
            2.3.2.1 MT3与DTNB的作用
            2.3.2.2 MT3与EDTA的作用
    第四节 Zn7-MT3的性质
    第五节 MT3的生理活性
    参考文献
第三章 走进MT3分子内部:突变体蛋白的研究
    第一节 EAAEAE插入六肽对MT3的影响
        3.1.1 突变分析及突变体蛋白的制备
        3.1.2 EAAEAE六肽插入段对MT3性质的影响
    第二节 T(5)的作用
        3.2.1 突变分析及突变体蛋白的制备
        3.2.2 T(5)对MT3性质的影响
        3.2.3 T(5)对维系MT3生理功能的重要性
    第三节 两个结构域之间的相互关系
        3.3.1 突变分析及突变体蛋白的制备
        3.3.2 单结构域的性质及应用
            3.3.2.1 基本谱学性质
            3.3.2.2 质子化去折叠研究
            3.3.2.3 各结构域突变体蛋白的反应性质研究
        3.3.3 ((结构域的功能探讨
        3.3.4 ((结构域向((结构域的转化研究
    第四节 linker在MT3分子中的作用
        3.4.1 突变分析及突变体蛋白的制备
        3.4.2 Linker对MT3结构、性质的重要性
        3.4.3 为什么Linker是KKS?
    第五节 色氨酸的启示
        3.5.1 基因构建和突变体蛋白的制备
        3.5.2 E4W突变对hMT3性质的影响
        3.5.3 Raman光谱中的应用
        3.5.4 荧光光谱研究MT3
    参考文献
第四章 寻找MT3作用的靶分子
    第一节 靶蛋白的寻找方案
    第二节 酵母双杂交技术探寻MT3的作用分子
        4.2.1 酵母双杂交技术的基本原理
        4.2.2 酵母双杂交技术探寻MT3的作用分子
    第三节 噬菌体展示技术探寻MT3的作用分子
        4.3.1 噬菌体展示技术的基本原理
        4.3.2 噬菌体展示技术探寻MT3的作用分子
            4.3.2.1 材料及试剂
            4.3.2.2 实验部分
            4.3.2.3 结果与讨论
    参考文献
Appendix1
Appendix2
致谢



本文编号：3939552