发展检测肠病毒71型（EV71）感染之单克隆抗体研究

发布时间：2024-05-08 00:06

　　目的：作为现今最为流行的嗜神经性病毒之一，肠病毒71型（enterovirus type71, EV71）近年来在亚太地区颇为盛行，引起各国政府高度重视。本课题旨在制备获得抗EV71单克隆抗体，鉴定并分析其应用及生物学功能，以探讨其于临床诊断治疗及抗病毒天然物筛选等方面的应用。 方法：以EV71Tainan/4643/98病毒株免疫BALB/c小鼠，采用B淋巴细胞杂交瘤技术进行细胞融合，以EV71感染之RD（Human Rhabdomyosarcoma，人横纹肌肉瘤）细胞作为抗体筛选细胞，经IFA（Immunofluorescence assay，免疫荧光）反复筛选及克隆化培养，最终得到能够稳定分泌抗EV71单克隆抗体的阳性杂交瘤细胞株，并对其抗体亚型及特异性进行鉴定。对各株抗体在FCM（flow cytometry，流式细胞）、Western blot、capture-ELISA（抗原捕获ELISA）、病毒中和等实验中的应用进行分析，并通过peptide-ELISA（肽段-ELISA）鉴定得各自相应抗原识别表位。应用所得抗体进行病毒检测及天然萃取物抗病毒功效鉴定。 结果：（1）共筛选...

【文章页数】：61 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1抗EV71单克隆抗体细胞免疫荧光鉴定infected组为EV71感染24h后RD细胞，mock组为正常未感染RD细胞

结果第一部分抗EV71单克隆抗体的制备与鉴定一、杂交瘤细胞株建立利用EV71Tainan/4643/98病毒株免疫6-8周龄BALB/c小鼠，以常规方法进行细胞融合，将复测为阳性的杂交瘤细胞经克隆化培养后，共获得5株能稳定分泌特异性抗EV71抗体的杂....

图2抗EV71单克隆抗体亚型鉴定Templateexample为MouseIgCaptureBeadArray示意图，mAb21、mAb22、mAb24、mAb26和mAb27为各单克隆抗体分析鉴定结果

17图2抗EV71单克隆抗体亚型鉴定Templateexample为MouseIgCaptureBeadArray示意图，mAb21、mAb22、mAb24、mAb26和mAb27为各单克隆抗体分析鉴定结果。

图3抗EV71单克隆抗体特异性鉴定mock组为正常RD细胞，其余为不同病毒各自感染RD细胞，PC组为positivecontrol，用各病毒对应之特异性抗体作为阳性对照

18图3抗EV71单克隆抗体特异性鉴定mock组为正常RD细胞，其余为不同病毒各自感染RD细胞，PC组为positivecontrol，用各病毒对应之特异性抗体作为阳性对照。各单克隆抗体组，则以各含抗体细胞培养上清液为特异性一抗。（蓝色—Hoechst，绿....

图4抗EV71单克隆抗体流式细胞检测PC组为positivecontrol，一抗为已知EV71抗体03F05-1，为阳性对照

20图4抗EV71单克隆抗体流式细胞检测PC组为positivecontrol，一抗为已知EV71抗体03F05-1，为阳性对照。各单克隆抗体组含抗体细胞培养上清液为特异性一抗。……为mock组，即未被病毒感染正常RD细胞，—infected组，即....

本文编号：3967197