微小隐孢子虫Cp2/P30双价核酸疫苗及亚单位疫苗的研究

发布时间：2024-05-24 23:42

　　为探讨CP2/P30基因对微小隐孢子虫的免疫保护作用,本研究在已知CP2,P30基因序列的基础上设计引物,采用DNA重组技术将CP2,P30基因及两基因串联基因与真核表达载体pVAX-1相连,构建重组真核表达载体,并将两基因单独及串联克隆入原核表达载体PET28-a中,构建原核表达载体。用重组真核表达质粒转染Hela细胞,用间接免疫荧光方法验证其在真核细胞中的表达;将原核表达载体转入大肠杆菌中表达出重组CP2,P30及CP2/P30蛋白。将核酸疫苗与亚单位疫苗分别免疫小鼠和怀孕期的山羊检测其免疫保护力。结果表明,扩增CP2,P30开放阅读框,经Blast比对显示同源性分别为99.41%和99.91%,酶切鉴定后表明载体构建成功。将重组质粒转染后的Hela细胞后,用间接免疫荧光方法在转染后的Hela细中检测到特异蛋白。提取总蛋白进行SDS-PAGE检测到与目的蛋白大小相符的蛋白条带,通过Western blot试验证实所得蛋白具有反应原性;核酸疫苗免疫保护结果表明,试验组与对照组相比,特异性抗体滴度、CD4⁺与CD8⁺T淋巴细胞数均差异极显著(...

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本文编号：3981389