抗FKBP52人源单链抗体的筛选及其完整抗体真核表达载体的构建

发布时间：2017-05-27 03:02

  本文关键词：抗FKBP52人源单链抗体的筛选及其完整抗体真核表达载体的构建，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:从大容量天然噬菌体抗体库中筛选抗FKBP52人源单链抗体,并进一步构建其真核表达载体。方法:以FKBP52为抗原,通过吸附、扩增、洗脱等过程,从大容量天然噬菌体抗体库中筛选特异性单链抗体,采用ELISA方法进行特异性测定,采用生物膜干涉方法测定亲和力,再经同源重组方法构建完整抗体的真核表达载体,通过PCR及序列测定对构建的载体进行验证。结果:经过4轮筛选,获得15种与FKBP52特异结合的噬菌体抗体,其中7种得到可溶性表达;序列分析表明,7种单链抗体重链可变区分属VHⅠ、VHⅢ和VHⅣ亚群,轻链可变区分属VκⅠ、VκⅢ和VλⅠ亚群;特异性结合活性较好的4株抗体的亲和常数分别为9.723×10-8、3.500×10-8、1.203×10-8和5.323×10-8;将亲和力较好的一株单链抗体轻、重链可变区基因分别拼接到含有人κ及Ig G1恒定区基因的p CMV-L和p CMV-H真核表达载体中。结论:筛选获得多株人源抗FKBP52单链抗体,并构建了完整抗体的真核表达载体。
【作者单位】： 南方医科大学第三临床医学院;海军总医院中心实验科;
【关键词】： FKBP 噬菌体抗体库 单链抗体 真核表达载体
【基金】：国家自然科学基金(81273311,81172119)
【分类号】：R392.11;Q78
【正文快照】： FKBP52)属于免疫抑制剂FK506结合蛋白(FKBP)家族,主要存在于细胞核内,也有一部分存在于胞质中。FKBP52由459个氨基酸残基组成,其编码基因FKBP4定位于染色体12p13.33,全长10 482 bp。已知FKBP52在调控甾体激素受体信号通路及中枢神经系统神经元微管功能中发挥重要作用[1]。研究

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