霍乱弧菌检测芯片的研制

发布时间：2025-02-08 10:00

　　霍乱弧菌是霍乱的病原菌。霍乱可以引起爆发、流行、大流行，严重危害人民健康，甚至社会安定。霍乱在南亚地区流行了至少上千年。自1817年以来，霍乱发生过七次世界大流行。历史上霍乱的七次大流行的病原菌，前6次是古典型霍乱弧菌，第七次是埃尔托型霍乱弧菌。1992年10月，一种被称为O139型的新型霍乱弧菌首次袭击印度大陆，引发了典型的霍乱爆发。一些专家指出，O139型霍乱弧菌很可能会引起第八次世界性霍乱大流行。 霍乱弧菌快速准确的检测，对于自然流行的监测与预防，具有重要意义。 20世纪90年代新出现和发展起来的基因芯片技术，是近年来在生命科学领域内兴起的一项高新技术。而用基因芯片检测霍乱弧菌的方法，迄今为止，世界范围内均末见公开报道。 为了成功地研制一块应用型的霍乱弧菌基因检测芯片，以λ噬菌体全基因组DNA模拟病原体霍乱弧菌的一个靶区域，试验性地对霍乱弧菌检测芯片探针的制备方法、样品的标记方法和芯片的杂交条件等进行了探索和优化。通过多种方法的试验和筛选，找到了一个简便有效的电泳条带的大规模批量回收转移方法，即牙签插胶法；在芯...

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【学位级别】：博士

【部分图文】：

图1一2一8中可以看出，当探针浓度达到芯片打印的饱和浓度以上后，

博士学位论文6.用入噬菌体全基因组探针制备了一个含有396个样品的DNA微阵列(图1一2一8)。在该微阵列上，所有的探针都是按照其浓度由低到高的顺序打印的。位于该阵列左上角的探针(第1行，第1一3列)浓度最低，为27u留mL;而位于左下角的探针(第36行，第31一33列)的浓度最....

图2一1一1霍乱弧菌EIN16961株的PCR鉴定

617bp和一段47lbP的片段，但仅能扩增霍乱弧菌古典型tcPA蛋白基因中的一段617bp的片段;引物对g一h能特异性地扩增0139型外膜糖基转移酶基因中的一段417bP的片段。从图2一1一1可以看出，引物对m一，a一b，c一d和e一f分别准确地扩增出了588bP，302bp，....

图2一1一3霍乱弧菌E1图2一1一4霍乱弧菌EIN16961

N16961株的CTX基因元件的LAPCR结果鉴定图2一1一4霍乱弧菌EIN16961株的VPI致病性岛的主要区域的LAPCR结果鉴定用LA一PCR引物对CTX一U和CTX一L成功地扩增出了预先设计的CTX基因元件上的大小为7019bp的DNA片段(图2一1一3)。通过用VPI致....

图2一2一2霍乱弧菌DNA微阵列中CTX和VPI两个亚阵列的分布和全部探针的排列(7)芯片打印之前，先将加好所有样品(霍乱探针、阳性对照、阴性对照、、3;

50%DMSO)、边角参照4个(131、140、311和320，50%DMSO);CTX与vPI两个亚阵列之间以两个空行间隔;每个样品打印3个点，最终打印成3Ox32的阵列(图2一2一2);图2一2一2霍乱弧菌DNA微阵列中CTX和VPI两个亚阵列的分布和全部探针的排列(7)芯片....

本文编号：4031357